【摘 要】
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目的 利用斑马鱼,建立一种体内类过敏快速检测模型,并利用此模型,检测药用辅料Tween-80及其杂质(氯乙醇、乙二醇和双氧水)的致敏性。方法 选择野生型AB品系斑马鱼幼鱼进行实验。优化检测用斑马鱼的发育阶段与数量、检测底物N-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯酰胺盐酸盐(BAPNA)的浓度和阳性对照化合物Compound 48/80的浓度,建立基于微孔板分析的斑马鱼类过敏反应快速检测模型。该模型以肥大细
【机 构】
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目的 利用斑马鱼,建立一种体内类过敏快速检测模型,并利用此模型,检测药用辅料Tween-80及其杂质(氯乙醇、乙二醇和双氧水)的致敏性。方法 选择野生型AB品系斑马鱼幼鱼进行实验。优化检测用斑马鱼的发育阶段与数量、检测底物N-苯甲酰-DL-精氨酸对硝基苯酰胺盐酸盐(BAPNA)的浓度和阳性对照化合物Compound 48/80的浓度,建立基于微孔板分析的斑马鱼类过敏反应快速检测模型。该模型以肥大细胞脱颗粒后释放的代表性物质类胰蛋白酶的诱导产生水平为检测标准,评价药物是否会诱发类过敏反应。利用此模型,定量分析10个不同批次的Tween-80的致敏性。结果 通过优化建模条件实验,成功建立了斑马鱼类过敏反应快速检测模型,同时用已知的会诱发类过敏反应的化学品验证了该模型检测化学品(药物)是否会诱发类过敏反应的可靠性和特异性。实验数据显示,Tryptase作为肥大细胞脱颗粒后的代表性产物,能够作为评价是否出现肥大细胞脱颗粒现象；而且能够特异性地检测出由类过敏反应诱发的肥大细胞脱颗粒。对10个不同批次的Tween-80的评价结果显示,不同批次Tween-80的致敏性不同,其致敏性呈浓度依赖性,其中3个批次的Tween-80能诱导斑马鱼类过敏反应,有明显的致敏性；其余7个批次的Tween-80不诱导斑马鱼类过敏反应；实验结果与在Beagle犬上进行的实验结果具有很好的一致性。此外,利用该模型,我们还评价了一种中药注射剂及其杂质的致敏性,结果与预期相符。结论 斑马鱼类过敏反应快速检测模型能可靠快速地评价中药注射剂及辅料的致敏性。由于具有快速、高效、可靠、成本低以及能够进行体内定量评价等优势,相信斑马鱼类过敏反应快速检测模型非常有希望成为中药注射剂和药物辅料类过敏反应检测的一种生物学质量控制标准。
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