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采用６５ｋＤａ热激蛋白基因为模板，选择位于３９８—８３６ｂｐ基因序列处的一对分枝杆菌通用引物，扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶作酶切分析，根据酶切带型的大小、强弱以及带型数量进行分枝杆菌菌种鉴定。通过对１２种分枝杆菌的ＰＣＲ反应和限制性酶切分析，可将检标本中大部分的分枝杆菌鉴定到种。该文式验无需进行杂交或使用放射性物质，在２４ｈ即可完成。