【摘 要】
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丙型肝炎病毒感染是慢性肝病及肝细胞癌的主要致病因素之一.JFH-1是第一个被报道能在细胞水平上产生感染性颗粒的cDNA克隆,它的成功构建极大促进了丙肝领域的基础研究.此后,
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海市瑞金二路197号,200025
【出 处】
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中华医学会第十三次全国感染病学术会议
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丙型肝炎病毒感染是慢性肝病及肝细胞癌的主要致病因素之一.JFH-1是第一个被报道能在细胞水平上产生感染性颗粒的cDNA克隆,它的成功构建极大促进了丙肝领域的基础研究.此后,其它基于JFH-1的基因型内或型间的重组克隆多为共有序列克隆.为了探索能否从临床分离株出发直接构建感染性克隆,设计了一个功能性克隆筛选策略:以JFH-1的cDNA作为起始的分子骨架,从一株基因型2a的临床分离株PR63的准种序列中筛选有功能的Core-NS3、NS3-NS5A及NS5B片段,然后把这些片段组合起来,通过进一步的优化及细胞内适应,得到了全长的PR63感染性克隆PR63cc.PR63cc是第一例源自中国丙肝患者血清的感染性克隆,它可以在Huh7来源的肝癌细胞系中高效扩增,最高感染性滴度达到1.6×105ffu/mL,也可以被HCV-E2抗体中和.和JFH-1相比，PR63cc对IFN-β和NS5B的抑制剂2-CMA的敏感性相似，但PR63cc对NS5A的抑制剂Daclatasvir高度耐受。反向遗传学分析表明NSSA第31位的甲硫氨酸残基是PR63c。对Daclatasvir不敏感的原因，这说明构建更多的感染性克隆对HCV抑制剂开发的重要性。综上所述，开发了一种从临床分离株出发直接构建感染性克隆的方法，将得到的PR63cc，从感染性、被E2抗体中和的能力及对一些HCV抑制剂的耐受性方面都和JFH-1做了一一对比。这种构建HCV全长感染性克隆的方法，不仅能应用于其他临床分离株，还可能为今后丙型肝炎患者的个性化治疗带来便利。
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