H5亚型禽流感病毒一步法复合RT-PCR检测方法的建立

来源 :中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:eworld5008
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由A型流感病毒引起的禽类的感染和/或疾病综合征,就是禽流行性感冒(简称禽流感,Avian Influenza,AI).引起AI的A型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)为单股负链RNA,由8个独立的RNA节段组成,AIV有10种蛋白,分别是聚合酶(PB2、PB1、PA)、血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1、M2)、非结构蛋白(NS1、NS2),根据其病毒粒子表面的囊膜糖蛋白-血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性差异,分为16个HA亚型和9个NA亚型.显著的生物学特征之一是亚型众多,变异频繁.至今为止从禽类体内已经分离到上千种毒力各异的毒株,不同亚型毒株对宿主的致病力差异显著,高致病性禽流感(High pathogenic avian influenza,HPAI)可引起鸡群100%死亡,被国际兽疫局确定为A类传染病.近年在全球时见报导的HPAI主要是H5N1和H7N2两个亚型,其中倍受关注的是H5N1.本研究建立了H5亚型禽流感病毒一步法复合RT-PCR检测方法.
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本研究利用壳聚糖为囊材,新城疫病毒液为芯材,戊二醛为交联剂,选择适当的乳化体系,制备出粒径小、分散性好的疫苗微球.与La Sota活疫苗、灭活疫苗同时对比免疫SPF鸡,进行MTT试验、血清IgG检测、攻毒保护试验等,证实新城疫壳聚糖微球疫苗具有较好的免疫效果.
鸡新城疫与大肠杆菌混合感染,经剖检、血清学试验、细菌培养、药敏试验等综合诊断,选用最敏感的药物进行防治.
本研究选取国内1999~2005年发生的24株NDV,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的34株NDV毒株,利用DNAStar软件,参照传统对F基因分型的方法,对上述毒株的F或HN基因进行基因分型,比较其差异.结果表明:F和HN的基因分型具有相似性,符合率79.3%.但新近分离的毒株,分
本研究根据GenBank上所公布的新城疫病毒(NDV)的全基因组序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株广西地方强毒株GX7/02、GX9/03和GX11/03的全基因组序列,并对其进行了比较分析.此3株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成,与GenBank公布的ZJ1、U.S/Largo/71、Italy/2736/00等7个毒株的全基因组序列长度相同,比LaSota、Clon
本研究用pGenesil-3 vector,构建了针对新城疫病毒NP基因的3个短发夹RNA表达载体,将其与转染试剂SiLentFectTM Lipid Reagent按1:3比例混合均匀后与新城疫病毒同时经绒毛尿囊腔接种于鸡胚中,17h后检测尿囊液中病毒的血凝价.结果表明,针对NP基因的3个位点的干涉质粒中,shRNA-NDV1有效地降低了病毒血凝价,对病毒的增殖产生了显著地抑制效应.
2005年8月,孟兴庄某饲养户,共饲养蛋鸡3500只,其中210日龄的经产蛋鸡2000只,初产蛋鸡1500只;8月15日该户饲养的经产蛋鸡发病,表现为甩头、鼻腔内有粘液、拉白色或绿色稀粪,遂认为是呼吸道疾病,用强力霉素配合慢呼泰乐(主要成分是泰乐菌素),加电解多维等药物,治疗5日无效,发现有360多只精神不振,呆立或有瘫痪,食欲废绝,饮水减退,拉白色黏液样或绿色稀粪,21日已有70余只死亡,初产蛋
本研究采取体外反应和口服两种方法评价2种中药对新城疫病毒的抑制效果.将不同浓度的2种中药与等量的200ELD50病毒于37℃条件下充分作用30分钟后,接种10日龄SPF鸡胚.试验结果表明:在试管中,1:10、1:20、1:40稀释度的编号为BJ-A的中药与新城疫病毒作用30分钟,有显著的杀灭病毒作用,但杀灭原因尚需进一步验证;将高、中剂量的BJ-A中药、市售中药(中药对照组)和利巴韦林(对照西药组
目前检测禽流感病毒的技术包括病毒的分离鉴定,PCR或荧光PCR方法和抗原捕获ELISA.病毒的分离鉴定需要的时间很长,PCR或荧光PCR方法由于需要专业的设备和人员,而限制了其广泛使用.有关研究人员一直探讨利用单克隆抗体技术检测禽流感病毒,并建立了一些相关技术.本研究建立了检测禽流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法.
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本研究以水溶性碳化二亚胺(EDAC)为介质,将兔抗禽流感病毒NP蛋白抗体共价偶联到羧化乳胶表面,建立了一种快速的禽流感病毒乳胶凝集检测方法,可以从鸡胚尿囊液、喉头拭子、泄殖腔拭子和内脏组织中快速检测所有亚型的禽流感病毒.该方法对肺脏组织的检出率可达97.9%,对肾脏、脑、肝脏、脾脏等组织的检出率均达到90%以上,对喉头拭子和泄殖腔拭子的检出率也达到60%以上,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊