【摘 要】
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目的：通过体外对SD大鼠雪旺氏细胞(Schwann cells, SCs)及胚胎成纤维细胞的分离、培养及鉴定,检测两种细胞间Ephrin/Eph-Sox2-N-cadherin信号通路蛋白的表达及其介导的SCs成簇群效应,观察两种细胞联合移植对皮瓣神经再生的影响.方法：1)用酶消化法分离提取SD大鼠胚胎成纤维细胞.2)采用胰酶/胶原酶消化法从新生SD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经分离提取SCs,接种培
【出 处】
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2015中华医学会整形外科学分会第十四次全国学术交流会暨第五届中国(福州)ISAPS美容整形外科高级研讨会
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目的：通过体外对SD大鼠雪旺氏细胞(Schwann cells, SCs)及胚胎成纤维细胞的分离、培养及鉴定,检测两种细胞间Ephrin/Eph-Sox2-N-cadherin信号通路蛋白的表达及其介导的SCs成簇群效应,观察两种细胞联合移植对皮瓣神经再生的影响.方法：1)用酶消化法分离提取SD大鼠胚胎成纤维细胞.2)采用胰酶/胶原酶消化法从新生SD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经分离提取SCs,接种培养、纯化SCs、鉴定SCs及其纯度.3)取P3代成纤维细胞与相同代次的SCs作共培养.4)建立大鼠腹壁失神经支配穿支皮瓣模型,按照不同移植成分分为四组.分别于细胞移植后2d、5d、7d、9d、14d各组取5只动物,制备皮瓣组织冰冻切片,免疫荧光染色观察神经再生.结果：1)本实验采用胰酶/胶原酶双酶化法分离SCs,利用Arab-C联合差速贴壁法可去除大部分成纤维细胞.培养的原代SCs 5～7d即可达80％～90％融合度.免疫荧光及流式细胞术结果显示SCs阳性率分别为95.87％± 0.97％和95.83％±1.07％.2)培养6h和24h后,免疫荧光结果显示共培养组中SCs形成簇群数量明显高于SCs单独培养组(P＜0.05),而共培养24h组SCs簇群数明显高于6h组(P＜0.05).Western blot结果显示,共培养组Eph受体、而转录因子Sox2和N＜adherin蛋白的表达量则显著高于SCs单独培养组,P＜0.05.3)经BrdU及DAPI示踪显示,移植的成纤维细胞和SCs到14d时仍大量存活.皮瓣组织免疫荧光染色显示,从细胞移植第2天至第14天,共移植组再生神经纤维数量明显优于SCs组、Fb组及对照组(P＜0.05).结论：成纤维细胞与SCs共移植可通过Ephrin/Eph-Sox2-N-cadherin信号通路调控SCs迁移并聚集成簇群,从而促进皮瓣神经再生.
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