【摘 要】
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目的：制备兔抗人KiSS-1分子多克隆抗体.方法 PCR法扩增出KiSS-1基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达, Ni2+-NTA Agarose亲
【机 构】
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九江市第一人民医院/南昌大学附属九江医院检验科 332000
【出 处】
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江西省医学检验第十六次学术交流会议暨王棠海教授百岁华诞学术研讨会
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目的：制备兔抗人KiSS-1分子多克隆抗体.方法 PCR法扩增出KiSS-1基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达, Ni2+-NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家免,制备多克隆抗体,并用ELISA、Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果：成功构建了KiSS-1原核表达载体pET28/ KiSS-1,高效表达并纯化KiSS-1蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6400,Western blot鉴定制备的抗体与KiSS-1蛋白能特异性结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人卵巢癌组织中的天然的KiSS-1.结论：成功地制备了效价高、特异性较强兔抗人KiSS-1抗体,为进一步建立KiSS-1的ELISA检测方法及探讨KiSS-1在卵巢癌的发生发展中所起的重要作用奠定了良好的基础.
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