【摘 要】
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目的 构建表达斑马鱼B细胞刺激因子且携带绿色荧光标记蛋白的重组质粒pIRES2-GFP-baff,筛选并获得阳性转基因斑马鱼并在RNA水平对相关基因表达予以验证。方法：通过RT-PCR
【机 构】
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河北医科大学河北省实验动物重点实验室石家庄
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目的 构建表达斑马鱼B细胞刺激因子且携带绿色荧光标记蛋白的重组质粒pIRES2-GFP-baff,筛选并获得阳性转基因斑马鱼并在RNA水平对相关基因表达予以验证。方法：通过RT-PCR法由斑马鱼脾脏克隆斑马鱼BAFF基因,构建BAFF过表达载体pIRES2-EGFP-baff重组质粒；利用斑马鱼胚胎显微注射获得转基因胚胎,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼；通过Realtime PCR检测baff,GFP过表达水平及baff下游相关基因bcl-2,IL-4表达情况。结果：成功构建了过表达baff的重组质粒pIRES2-GFP-baff,显微注射后筛选出有绿色荧光蛋白稳定表达的转基因斑马鱼；RT-PCR分别在细胞、胚胎及幼鱼上验证了BAFF、GFP的过表达以及下游基因bel-2的激活。结论：通过胚胎显微注射可成功获得过表达baff的转基因斑马鱼,同时Realtime PCR法可验证GFP及BAFF过表达,为建立红斑狼疮转基因斑马鱼模型奠定基础。
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