【摘 要】
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目的 组合两种体外方法鸡胚绒毛尿囊膜血管试验(CAMVA)和牛角膜浑浊及通透试验(BCOP)评价个人护理品的眼刺激,为个人护理用品的眼刺激性的体外评价提供数据支持.方法 分
【机 构】
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广州市华代生物科技有限公司,广东广州510623
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目的 组合两种体外方法鸡胚绒毛尿囊膜血管试验(CAMVA)和牛角膜浑浊及通透试验(BCOP)评价个人护理品的眼刺激,为个人护理用品的眼刺激性的体外评价提供数据支持.方法 分别采用CAMVA、BCOP和Draize兔眼试验对45种个人护理产品进行测试,并预测眼刺激分类.CAMVA实验：将SPF级白莱航鸡胚孵育至第4天,吸取约3 ml蛋清后继续培养至第14天.开壳暴露CAM膜放置O形环,取40 ul(固体40 mg)不同浓度受试物直接加于环内,37℃孵育30 min后观察血管变化,观察阳性反应(充血、鬼影血管、出血等)鸡胚数,计算RC50(使半数鸡胚出现阳性反应的受试物浓度).以RC50＞3预测产品无眼刺激性,RC50＜3预测可能眼刺激性.BCOP实验：从屠宰场获得新鲜牛眼,放入冰冷HBSS运回实验室.分离并选取完好角膜装配于支架中.培养箱平衡1h,移除前室培养基后加入750 ul受试样品,培养箱孵育10 min,去除受试物,后孵育2h.读取角膜浊度.加入荧光素钠溶液,孵育90 min后收集后室液体,490 nm波长下读取吸光度值.计算体外评分(IVIS)=浊度值+15×吸光度值.如IVIS≤25,预测无/弱刺激性；25＜IVIS值≤55,预测中度刺激性；IVIS ＞55,预测严重刺激性/腐蚀性.结果 采用CAMVA法可以全部区分33种无刺激性样品,采用BCOP法可全部区分12种刺激性样品,其中CAMVA与体内实验区分无刺激性样品的一致性为(84.8％),BCOP与Draize试验区分刺激性样品的一致性为83.3％.CAMVA和BCOP组合可对全部样品的眼刺激性正确分类,准确性达到100％.结论 CAMVA实验模拟结膜的损伤,对于检测化合物的从无刺激性到中度眼刺激性效果较好,适合作为个人护理用品配方、醇类物质和表而活性剂的筛选.BCOP实验适用于检测中度、重度和极重度眼刺激性物质,但对区分轻度到轻微水平的刺激物不太敏感.组合BCOP与CAMVA的整合试验策略可用于个人护理品的眼刺激评价,其预测范围可覆盖无刺激性到严重刺激性.
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