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目的意义观察新型眼镜蛇毒类心脏毒素碱性蛋白对血管生成的影响、体内抗瘤活性研究及初步机制探讨,为寻找以抑制肿瘤血管生成为靶点的天然活性物质提供依据。材料和方法新型眼镜蛇毒类心脏毒素碱性蛋白(novel cardiotoxin-like basic protein from Naja naja atra venom,NCBP)由中国科技大学生命科学学院滕脉坤教授提供,该蛋白能选择性地抑制血管内皮细胞的增殖并诱导内皮细胞凋亡。本研究采用鸡胚绒毛尿囊膜血管生成模型及建立C57BL/6小鼠移植黑色素瘤模型,通过血管显微图像分析及对荷瘤小鼠瘤体称重、瘤体免疫组化染色以及肺组织HE染色等方法,观察NCBP对血管生成的影响及对肿瘤生长、肿瘤血管生成和抗肺转移作用及其对VEGF、bFGF表达的影响。结果NCBP呈剂量依赖性减少鸡胚绒毛尿囊膜血管生成,通过各组局部血管面积分析,以溶剂对照组血管面积为100%参照,当NCBP用药剂量为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μg/胚时,各组实验区域血管面积比溶剂对照组血管面积减少,减少率分别为9.10%、26.29%、46.08%、64.51%、66.70%,血管面积的减少程度与NCBP剂量呈正相关(r=0.848,P<0.001)。NCBP能抑制C57BL/6小鼠移植黑色素瘤的生长:①对小鼠移植瘤的抑瘤率比较,荷瘤小鼠在用药14天后,NCBP实验组低剂量(0.075mg/kg)抑瘤率为7.31%,中剂量(0.3mg/kg)抑瘤率为27.78%(P<0.05),高剂量(1.2mg/kg)抑瘤率为41.81%(P<0.01),1.2mg/kg NCBP的抑瘤率与临床常用的抗黑色素瘤药氮烯米胺(DTIC)(60mg/kg)的抑瘤率(47.66%)相近(P>0.05)。相关分析表明瘤重与NCBP剂量呈负相关(r=-0.524,P<0.01),有剂量效应关系。②对小鼠移植瘤瘤体体积的比较,在给药14天后,1.2mg/kg和0.3mg/kg NCBP组及DTIC组测定的肿瘤体积,与生理盐水组比较,差异有显著性(P<0.05)。表明NCBP对肿瘤的生长有一定的抑制作用。③对小鼠移植瘤血管生成微血管密度及瘤体组织表达VEGF、bFGF的影响,经1.2mg/kg NCBP治疗14天后瘤组织内微血管密度计数明显减少,其MVD计数为6.3±1.1,与阴性对照组(14.6±2.0)相比,有显著性差异(P<0.01);瘤组织内VEGF、bFGF蛋白表达也显著降低(P<0.05);④对肺转移的抑制作用,C57BL/6小鼠皮下接种黑色素瘤后第21天后发现有肺转移,1.2mg/kg NCBP可抑制黑色素瘤的自发性肺转移,其转移结节数为5.3±3.0,与阴性对照组(12.7±6.3)相比,有显著性差异(P<0.01)。结论:新型眼镜蛇毒类心脏毒素碱性蛋白具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用,并对C57BL/6小鼠移植黑色素瘤小鼠,通过减少瘤组织内的微血管数目、降低移植瘤内VEGF、bFGF的表达等达到抑瘤作用及抗瘤的自发性肺转移作用。表明新型眼镜蛇毒类心脏毒素碱性蛋白是一种潜在的具有以抑制肿瘤血管生成为靶点的抗肿瘤活性的天然活性物质,值得深入探讨。