【摘 要】
：
2013年6月,某动物园两只同窝驯养东北虎幼虎相继死亡.剖检尸体,均表现为双侧肾脏肿大,脑组织水肿.从内脏中分离获得2株革兰氏阴性杆菌,经细菌的形态特征、培养特性、Phoenixl00细菌鉴定仪及分子生物学鉴定,确认2株细菌是奇异变形杆菌,其rpoB基因序列与奇异变形杆菌标准参考株HI4320(AM942759)的同源性为gg.g％.经Denis线特性检测以及Rep/ERIC和PFGE分型分析,确
【机 构】
：
军事医学科学院军事兽医研究所,国家林业局野生动物疫病检测中心,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,吉林长春 130122
【出 处】
：
第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
论文部分内容阅读
2013年6月,某动物园两只同窝驯养东北虎幼虎相继死亡.剖检尸体,均表现为双侧肾脏肿大,脑组织水肿.从内脏中分离获得2株革兰氏阴性杆菌,经细菌的形态特征、培养特性、Phoenixl00细菌鉴定仪及分子生物学鉴定,确认2株细菌是奇异变形杆菌,其rpoB基因序列与奇异变形杆菌标准参考株HI4320(AM942759)的同源性为gg.g％.经Denis线特性检测以及Rep/ERIC和PFGE分型分析,确认从两只幼虎中分离到的2株细菌为同一株奇异变形杆菌.该菌携带β-内酰胺类耐药基因CTX-M-9和奇异变形杆菌致病岛ICEpml,具有较强的毒力和耐药性,能致死小白鼠,死亡小鼠出现脑水肿病理变化.本试验是首次从患病虎内脏中分离到奇异变形杆菌,为今后相关传染病的病因分析诊断、流行病学调查、疾病防治等提供了参考依据,也为奇异变形杆菌致病性等方面的研究提供了可借鉴的方向.
本次病例中,从两只同窝东北虎幼虎中分别分离到奇异变形杆菌.首先对细菌进行了生化和分子生物学鉴定,其中rpoB基因编码细菌RNA聚合酶p亚基,rpo基因普遍存在于细菌染色体上,在长期进化过程中具有高度保守性.当16S rRNA不易区分亲缘关系较近的菌种时,可利用rpo基因进行区分.
本次试验用细菌表现型和分子生物学方法对两株细菌进行了同源性鉴定.Dienes检测是专门用来鉴定奇异变形杆菌的遗传差异的方法,其方法依赖于奇异变形杆菌在固体琼脂平板上的迁移生长特性,当两株有遗传差异的菌在迁移时,在迁移交汇处会相互抑制而出现肉眼可见的分界线,即Dienes线;反之,没有遗传差异的菌株在迁移交汇处会相互融合,不出现Dienes线.Rep/ERIC-PCR是根据所有细菌,包括不同种属以及同种细菌的染色体上一段重复序列设计的PCR检测方法,真细菌的基因组中分散存在DNA重复序列,主要包括基因外重复回文序列(Repetitive Extragenic Palindromic,REP)、肠杆菌基因间重复一致序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus.ERIC),它们在进化过程中高度保守,因此在菌株、种、属水平上都有明显的分布差异.1996年,REP、ERIC-PCR作为一种细菌基因组指纹分析方法,被用于细菌基因组间的差异分析.由于不同菌株该重复序列的长度不同,因此可以作为一种用来鉴定两株细菌同源性的方法,而PFGE方法是目前临床常规的细菌溯源方法.通过以上方法的鉴定结果表明,两株细菌为同一株奇异变形菌,并感染了同窝的两只幼虎.
为了明确两只幼虎的死因,同时进行了部分病毒学检测.死亡虎出现了腹泻和脑水肿的病理症状,所以针对其腹泻症状进行了猫细小病毒、针对脑水肿症状进行了A型流感病毒、狂犬病病毒和乙型脑炎检测,结果均为阴性.虽然在两只幼虎中分离获得了同一株奇异变形杆菌且未检测到部分可疑病毒,但是由于无法进行回归试验复制该病,该菌在本次病例中起到了重要作用.
通过此次分离鉴定工作,获得了一株具有较强致病性和耐药性,可使幼虎发生感染的奇异变形杆菌.由于奇异变形杆菌在环境中广泛存在,感染该菌后动物内脏器官受损、机体免疫力下降、病死率增加.因此,在日常饲养管理中要加强预防,严控饲料来源和水源,科学规划饲养密度,严格执行病健动物的隔离饲养,减少继发感染的机率.当确定感染奇异变形杆菌后,可用氨基糖苷类和青霉素类药物进行治疗.
其他文献
为确定引起某猪场猪胸膜肺炎的病原,研究发病猪肺脏的病理学变化,对病变猪肺脏进行了病原分离和组织切片的制作.本实验采用PCR的方法，扩增出从送检病料中分离的细菌的16S rDNA，并测序，将所得序列与己发表的微生物序列进行同源性比对，结果显示该分离株与多杀性巴氏杆菌的同源性达99％以上，可以判定该分离株可能为多杀性巴氏杆菌。此外对病变肺脏进行石蜡切片的制作，HE染色后在光学显微镜下观察，病变的肺组织
为准确了解沙门菌受NTG及VBNC条件作用,其基因组发生突变的情况.本研究用Msel和EcoRI两种酶对VBNC沙门菌突变体基因组DNA进行酶切,酶切产物与接头连接后,依次进行了预扩增和选择性扩增.扩增产物经8％PAGE电泳与DHPLC检测后,分别获得AFLP与DHPLC图谱.两图谱综合分析结果显示,突变体存在1条大约200bp的特异性条带,是典型的分子标记.整个AFLP图谱共扩增出108条带,这
为了解吉林省部分地区猪源大肠杆菌的耐药情况,于2013年采集318份猪源样品,分离鉴定大肠杆菌275株.以氨苄西林、头孢噻肟等15种药物进行了药物敏感性实验.结果表明,大肠杆菌分离株对四环素、氨苄西林和磺胺甲基异恶唑耐药最严重(83.63％、52.72％、51.27％),全部菌株对美洛培南、多粘菌素敏感,其中176株菌表现为对3类以上抗生素的多重耐药表型(64.00％).从仔猪腹泻样品分离大肠杆菌
为弄清某规模化养猪场感染和流行的副猪嗜血杆菌(HPS)菌株的耐药性、血清型及基因型,本试验自该猪场发生浆膜炎和关节炎的猪不同组织样品中分离到6株HPS菌株,通过细菌培养特性、生化试验和PCR扩增细菌16S rRNA基因片段并测序对分离株进行了鉴定;进而鉴定了分离株对不同类别抗生素的耐药性;最后对分离株进行血清分型和RAPD基因分型并分析两者的相关性.结果显示,自病猪不同组织脏器中分离鉴定了6株HP
金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌,能引起多种感染性疾病.前期研究表明,噬菌体裂解酶LysGH15在对金黄色葡萄球菌引起的疾病治疗方面表现出巨大潜力.为了揭示其高效裂解活性的作用机制,本研究对LysGH15进行了蛋白质结晶条件的筛选.未能筛选到LysGH15全长蛋白结晶的条件,通过小角散射分析确定了LysGH15在溶液状态下的表面构象,表明其具有很大的柔性,解释了为何无法获得其晶体.进一步对LysG
以牛分枝杆菌PPDB为刺激抗原的IFN-γ试验(PPDB-IFN-γ)是OIE推荐的牛结核病实验室辅助诊断方法,ESAT-6(PE)和CFP-IO(Pc)蛋白是结核分枝杆菌复合群致病菌株的特异性抗原,其基因在非结核分枝杆菌和卡介苗的基因组中均不存在.为了提高PPDB-IFN-y的敏感性和特异性,在此基础上建立新的PPDB-PE/C-IFN-,诊断方法.对PE和PC分别进行原核表达并纯化.用PPDB
研制牛种布鲁氏菌A因子血清和羊种布鲁氏菌M因子血清,用于光滑型布鲁氏菌特异性种属鉴定.将灭活牛种布鲁氏菌2308株及羊种布鲁氏菌16M株免疫1.5-2kg家兔各5只制备高免血清.对高免血清采用抗原交叉吸附的方法,制得A、M因子血清,分装冻干后置-20℃保存.微量试管凝集试验显示:研制的A因子血清对16M抗原在1:2.5时无凝集现象,对2308抗原凝集价为1:320;研制的M因子血清对2308抗原在
猪大肠杆菌病主要包括新生仔猪大肠杆菌腹泻(黄痢、白痢)、迟发型大肠杆菌病和水肿病.本猪场患病仔猪于出生12小时后开始出现症状,20头仔猪中有9头仔猪突然发病,精神沉郁,全身衰弱,迅速死亡,而后其他仔猪相继发病.病猪肛门失禁,排黄色粘稠粪便,并混有凝乳小块和小气泡,味腥臭.为了查明本猪场仔猪腹泻的病因,对腹泻仔猪进行采样,对疑似病例进行了细菌分离鉴定和药敏试验,为本猪场仔猪腹泻的防控提供行之有效的办
大肠杆菌是引起消化道及泌尿感染最常见的致病菌.随着p-内酰胺类抗生素的广泛使用,大肠杆菌对此类抗生素的耐药日趋严重,产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠杆菌成为导致社区获得性感染的主要原因.伴侣动物在细菌耐药性传播中扮演重要角色,因为它们接触到抗菌药物与用于人类治疗抗生素更为接近.它们与人类拥有共同的生活环境,与人类接触也更为紧密.大量报道表明,人类与伴侣动物存在共同的耐药菌或者携带共同的耐药相
鉴定一株从赤大袋鼠颈部脓液中分离纯化的革兰氏阴性球杆菌.经细菌分离培养,Phoenix100细菌生化鉴定仪鉴定,细菌rpoB和16S rRNA序列分析,该分离菌为多杀性巴氏杆菌( Pasteurella mutocida),16S rRNA序列与P-mutocida(登录号:CP003022)同源性达99.9％,rpoB基因与P.mutocida(登录号:CP003022)同源性达99.4％.小鼠