未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞分离培养与鉴定

• 作 者: 田勇;石良艳;赖志文;沈薇;杨书红;罗爱月;丁婷;王世宣;
• 机 构: 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科 430030
• 出 处: 中华医学会第十次全国妇产科学术会议
• 发表日期: 2012年期

　　目的：建立一种简单有效的分离未成年小鼠卵巢卵泡膜间质细胞的新方法,并对分离细胞进行培养和鉴定。方法：选取未成年C57 BL/6小鼠(21-25d)的卵巢组织,在体式显微镜下分离干净周围组织并去包膜,用机械法去除颗粒细胞,将残余组织在LSP培养基清洗两次后用胶原酶Ⅳ-DNase(4g/L胶原酶,10g/L DNase和10g/L BSA溶于M199培养液)在37℃,5％ CO2培养箱中消化分离卵泡膜间质细胞,用含10％胎牛血清及10ng/ml雄激素的McCoy s5a培养基进行培养,并用免疫细胞化学技术、激素检测对培养的卵泡膜间质细胞进行鉴定.同时在50ng/ml FSH和20ng/ml LH的条件下检测细胞激素分泌反应性.结果：通过上述分离方法得到的细胞存活率在90％以上，细胞在培养24小时内贴壁生长，细胞贴壁生长成梭形和不规则形，且能在McCoy s5a培养基中分裂增殖。免疫细胞化学结果显示贴壁生长细胞AMH蛋白阳性表达<5％，而砂SOscc蛋呈阳性表达>95 ％；贴壁细胞培养24小时之后雄激素浓度为648. 65 ng/dl (n=6)，雌激素浓度组的睾酮水平明显高于FSH组和基础培养基组(P<0.05),FSH组睾酮水平和基础培养基组未见明显统计学差异(P>0.05)，在这三组中均未检测到雌激素水平的改变。结论：通过本实验的分离和培养方法可以得到大量贴壁生长的卵泡膜间质细胞，其中很少有颗粒细胞的混杂，且对LH具有良好反应性，此方法可以快速、高效的进行小鼠卵泡膜间质细胞的分离培养。