亨廷顿相关蛋白1(HAP1)对乳腺癌细胞MCF-7生长抑制作用及其机制的体内实验研究

来源 :第十七届全国临床肿瘤学大会暨2014年CSCO学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dtmark
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目的:通过裸鼠体内实验探讨亨廷顿相关蛋白1(Huntingtin-Associated Protein 1,HAP1)过表达对人乳腺癌细胞MCF-7增殖生长的抑制作用及其可能机制,以期为乳腺癌提供新的基因治疗靶点.方法:1)构建裸鼠荷瘤模型:15只体重均等的4周龄雌性裸鼠被随机分成3组,每组5只,普通细胞株MCF-7和前期已构建完成的空质粒pBabe-puro(嘌呤霉素)转染细胞株以及pBabe-puro HAP1过表达细胞株被分别种植于3组裸鼠体内,分别标记为MCF-7 control组,MCF-7-pBabe-puro组和MCF-7-pBabe-puro-HAP1组;植瘤前需通过实时荧光定量PCR法和蛋白印迹法鉴定MCF-7-pBabe-puro-HAP1确为HAP1过表达细胞;2)待裸鼠成瘤后直至荷瘤实验终止,定期使用游标卡尺量取瘤体大小,绘制肿瘤生长曲线;3)荷瘤实验终止后取出瘤组织,称取各组种植瘤瘤重,计算抑瘤率;4)RT-PCR法和Western Blot法检测3组瘤体组织HAP1表达情况;5)荧光TUNEL法检测3组肿瘤组织细胞凋亡情况;6)蛋白印迹法检测各组瘤体组织Caspase 3和Caspase 9表达.
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