【摘 要】
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本研究应用生物信息学分析工具对大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原(flic基因)抗原表位进行分析,筛选出抗原表位较富集的胞外区片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达.构建
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,南京210002
【出 处】
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江苏省生物化学与分子生物学第九届会员代表大会暨第十次学术会议
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本研究应用生物信息学分析工具对大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原(flic基因)抗原表位进行分析,筛选出抗原表位较富集的胞外区片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达.构建重组质粒pgex4t-2-flic和pet28a(+)-flic,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,GST胶亲和层析技术和金属螯合层析技术纯化GST标签和His标签的目的蛋白,获得了高纯度的GST-flic和His-flic.使用His-flic抗原免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测体液免疫效价,兔颈动脉取血并离心制备获得大量兔抗血清.两种标签目的蛋白的纯化和兔血清多抗的制备为大肠杆菌O157:H7的检测提供了实验依据和物质基础.
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