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目的:从XX中药提取物在离体研究中显示出显著的抗补体活性,且对小鼠急性肺损伤也具有良好的防治效果,而其抗炎作用机制尚未清晰.本部分实验在离体巨噬细胞炎症模型上,观察XX中药提取物的调节作用,包括对吞噬、趋化和分泌前炎症相关因子功能的影响.
方法:提前3天用5%巯乙醇酸钠(1mL/只)刺激腹腔巨噬细胞活化.分离,培养腹腔巨噬细胞,调整细胞浓度1×106个/ml,贴壁培养2h后,进行以下实验:(1)吞噬实验:加入100μL 2%鸡红细胞,实验分为空白对照组,吞噬对照组,药物(三个剂量组的中药提取物)处理组,地塞米松阳性药物组.实验设置3复孔,共培养1h后,显微镜下观察5个视野,计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量及其吞噬的鸡红细胞数量;(2)趋化实验:在趋化小室上室加入巨噬细胞,趋化小室下室做以下处理:分为正常对照组,C5a刺激组;三个不同浓度XX中药提取物+C5a组;地塞米松+C5a组;(3)分泌实验,在96孔培养板中,加入刺激剂LPS,随后加入三个剂量组的XX中药多糖,地塞米松阳性药,培养24h后,收集巨噬细胞培养上清,采用Gress法检测NO含量,采用ELISA方法检测其中分泌的分泌IL-1β、TNF-α、IL-6等细胞因子。
结果:实验结果表明,与地塞米松抑制腹腔巨噬细胞吞噬作用不同,XX中药促进了巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用;趋化功能方面,C5a引起巨噬细胞强烈的趋化作用,而三个不同浓度的XX中药提取物可以不同程度地抑制C5a引起的趋化效应;分泌功能方面,LPS强烈促进巨噬细胞NO,IL-1p、TNF-α、IL-6等细胞因子的分泌,而不同浓度的XX中药提取物可以剂量依赖性的抑制这些炎症因子的释放。
结论:炎症反应时,单核巨噬细胞和中性粒细胞趋化、粘附、聚集到炎症部位,细胞增殖同时合成并释放炎症因子和活性氧,参与细胞和组织损伤。因此,对于炎症反应,巨噬细胞的参与与其功能的发挥都起着极其重要的作用,抑制或适当调节巨噬细胞的功能对于各类炎症性疾病(急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症,关节炎,肝炎等)都可能产生较好的治疗效果。