基因Ⅶ型新城疫病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

• 作 者: 孟春春[1]段云兵[2]仇旭升[3]金仕强[1]詹媛[1]张向乐[1]于圣青[1]丁铲;
• 机 构: 中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241
• 出 处: 第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛
• 发表日期: 2011年期

　　根据Ⅶ型新城疫病毒基质蛋白基因保守序列设计并合成特异性引物，建立快速检测Ⅶ型新城疫病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆Ⅶ型新城疫病毒M基因靶序列并将其连入T-Easy载体，制备阳性标准品，优化反应条件，以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线，其相关系数为0.999。检测结果显示，该方法的灵敏度可达100copies/μL。而且特异性良好，除Ⅶ型新城疫病毒外，对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅸ型新城疫病毒、H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好，批内和批间变异系数均小于3％。对40份实验感染样品的检测结果表明，该方法比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高、特异性更强。