【摘 要】
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目的：大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、分化及鉴定；观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响、超氧化物歧化酶的和微量丙二醛的测定及bcl-2、Caspase-3表达
【机 构】
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广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科 530021
【出 处】
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第十八届全国中西医结合骨伤科学术研讨会
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目的：大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、分化及鉴定；观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响、超氧化物歧化酶的和微量丙二醛的测定及bcl-2、Caspase-3表达的变化.方法：应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞及鉴定；成脂诱导,行油红O染色；成骨诱导行碱性磷酸酶活性检测和硝酸盐染色；置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900 mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验；置于0,100,200,300,400,500 mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况；置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平,超氧化物歧化酶(SOD)的测定,微量丙二醛(MDA)的测定.结果与结论：本实验研究表明应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠BMSCs符合其表面标记物,在诱导剂的作用下能分化为成骨细胞和成脂细胞；MTT检测结果显示427 mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度；AnnexinW PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P＜0.05).与0mmol/L组比较,乙醇作用24 h后427 mmol/L组bcl-2 mRNA表达和超氧化物歧化酶水平下降,Caspase-3mRNA表达水平和微量丙二醛(MDA)升高增加(P＜0.05).说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活、超氧化物歧化酶(SOD)降低和微量丙二醛(MDA)升高有关.
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