论文部分内容阅读
目的:采用蛋白质组学技术观察糖肾方对自发性2型糖尿病肾病模型OLETF大鼠的影响,以差异表达蛋白为切入点,探讨糖肾方治疗糖尿病肾病的作用机理及作用靶点.
方法:从日本引进自发性2型糖尿病肾病模型OLETF大鼠,按照随机分组法分为模型组和糖肾方组,以遗传背景相同、同周龄、性别的LETO大鼠为正常对照组.每4周观察大鼠一般状态、24h尿蛋白定量，在36周龄和56周龄两个时间点分别取材，半定量检查肾小球及肾小管间质病理变化。并分离肾皮质，根据溶解度分为可溶和难溶蛋白。获得蛋白样品进行双向电泳分离，胶体考马斯亮蓝染色，将图像扫描输入计算机，通过ImageMaster 6.0软件对凝胶进行数据分析，寻找差异表达蛋白点。将凝胶中的差异蛋白点切出，经胶内胰蛋白酶解和MALDI-TOF-MS获得肽质量指纹谱并进行Mascot数据库检索。利用GoMinerTM、BINGO软件对差异蛋白质进行Gene Ontology（GO）分类和信息学分析。
结果：糖肾方能减少OLETF大鼠的24h尿蛋白排泄，减轻肾小球及肾小管间质病理改变，显示出良好的药效学保护作用。36和56周龄差异蛋白质组学结果：与模型组大鼠相比，糖肾方组大鼠可溶蛋白中5个蛋白点（Tsta3，rCG56248，Lactb2，BOP1NT，Mixture ofA2GPand Zfp90）下调，5个蛋白点(Ech1，Psma1，Gsto1，Cryab，Hmgb1)上调；难溶蛋白中 4个蛋白点(Vcl_predicted，MYL6，Uqcrfs1，Gpx3)下调，5个蛋白点(Timm，Atp6v1e1，Ppia，LOC683519，Dmgdh)上调。这些差异蛋白的分子功能主要和抗氧化活性，催化活性，酶调节活性，转运活性相关；并参与细胞周期、凋亡、细胞增殖、蛋白质代谢、脂肪酸代谢，氧和活性氧代谢等多种生物过程。图像分析得到的20个差异表达蛋白鉴定结果显示，它们可基本分为以下5类：第一类与细胞结构和功能相关；第二类与氧化应激相关；第三类与有脂质代谢相关；第四类为蛋白降解相关；第五类为在DN中未研究过的蛋白。
结论：比较蛋白质组学研究结果显示，糖肾方给药治疗24周和44周后，出现稳定表达的差异蛋白质群，提示糖肾方可能通过这些途径多系统、多层次地起到治疗糖尿病肾病的作用。