团头鲂病原嗜水气单胞菌的分离鉴定及检测方法的建立

来源 :第十二届全国水产青年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:javajnihook
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  以患病团头鲂为研究对象,通过对病变组织进行细菌分离、纯化培养,并采用人工回感试验以确定其致病性;通过生理生化特性、16S rRNA基因部分序列和药物敏感性测定,对团头鲂出血病病原病进行了研究。根据Gen Bank收录的细胞兴奋性肠毒素alt基因和气溶素结构基因aerA的保守序列分别设计能检测alt和aer基因的特异性引物,并进行PCR反应体系和反应条件的优化。建立了一种快速检测嗜水气单胞菌双重PCR方法。结果显示:从患病的团头鲂肝脏中分离得1株优势菌WJ-8,将菌WJ-8进行人工回感试验,其患病症状同自然发病症状,证明其对团头鲂有致病性;该菌的形态特征、主要理化特性、16S rRNA序列测定结果及系统发育树的构建表明该菌株为嗜水气单胞菌。双重PCR反应结果显示在同一PCR反应体系中,供试菌株嗜水气单胞菌扩增两条目的带,扩增产物的片段大小分别为200 bp和280 bp;敏感性试验结果显示,该双重PCR最低能检测3×104 CFU/mL菌体浓度的嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌模板DNA的检出极限为490 pg/μL;同时对送检的患病水产品进行抽检,检测出阳性结果的样品均可分离到优势生长的嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示,该菌对氟苯尼考、甲哌利福霉素、链霉素、卡那霉素等22种药物敏感,对青霉素、氨苄西林、羧苄青霉素、苯唑西林等12种药物表现出耐药性。
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