【摘 要】
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目的 构建肝特异性Alb(白蛋白)启动子调控HBEGF(Heparinbinding-epidermal growth factor)表达的慢病毒载体pLV-ATTG 。方法 首先以pAlb-Cre-GH/BS 为模板,PCR 扩增目的
【机 构】
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南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所,广东广州510515;南方医科大学肿瘤研究所,广东广州510515南方医科大学肿瘤研究所,广东广州510515南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所,广东广
【出 处】
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第十七届中南地区实验动物科技交流会
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目的 构建肝特异性Alb(白蛋白)启动子调控HBEGF(Heparinbinding-epidermal growth factor)表达的慢病毒载体pLV-ATTG 。方法 首先以pAlb-Cre-GH/BS 为模板,PCR 扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion 克隆至Not I 酶切的pTRECK6-GFP 中,获得pAlb-TRECK6(TRECK：toxinreceptor-mediated conditional cell knockout)；接着以pAlb-TRECK6 为模板,PCR 扩增Alb-TRECK6,In-Fusion克隆至Xba I/BamH I 酶切的pCD823A-1 载体(该载体已卸去EF-1α 启动子)中,获得最终的慢病毒载体pLV-ATTG,所构建的质粒均经测序和酶切鉴定。然后按Invitrogen 公司推荐的标准程序进行慢病毒包装。包装成功的慢病毒LV-ATTG 感染肝癌细胞株BEL-7402 细胞,倒置荧光显微镜检测copGFP 表达,并收集细胞提取总RNA,以检测HBEGF 表达。结果 酶切鉴定和测序证实成功构建了慢病毒载体pLV-ATTG；LV-ATTG 感染BEL-7402 细胞后,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光,同时qRT-PCR 检测结果显示HBEGF转基因能够正常表达。结论 成功构建Alb 启动子调控HBEGF 表达的慢病毒表达载体,为相关后续研究奠定了坚实基础。
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