【摘 要】
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目的：构建携带大鼠视黄酸核受体γ (retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院儿童营养研究中心,重庆市 400014
【出 处】
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国际发育与疾病高峰论坛暨第六届儿童保健高层论坛、重庆市儿科年会
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目的：构建携带大鼠视黄酸核受体γ (retinoic acid receptor γ,RARγ)的重组腺病毒,为研究RARγ在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的作用奠定基础.方法：体外扩增大鼠RARγ基因,目的基因经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后定向连接到pAdTra ce-TOX穿梭质粒多克隆区域,以构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrace-RARγ,并在BJ5183大肠杆菌中与骨架质粒pAd Easy-1重组构建腺病毒载体pAd-RARγ,PacⅠ酶切后转染HEK 293细胞包装腺病毒,并多次感染HEK 293细胞进行腺病毒扩增.腺病毒Ad-RARγ感染大鼠MSCs,之后分别提取mRNA和 总蛋白,采用Real-time PCR和 Western blot检测RARγ的均表达.结果：经PCR、酶切及基因测序多种技术手段证实重组腺病毒穿梭质粒pAd Tra ce-RA Rγ的正确性,并在BJ5183大肠杆菌中成功实现同源重组获得腺病毒载体pAd-RARγ,包装所得腺病毒Ad-RARγ经扩增后滴度高达2.0×108pfu/ml.Ad-RARγ对MSCs感染率达60-7 0％,并明显增强RARγ基因和蛋白的表达.结论：成功构建携带RARγ的重组腺病毒AdRARv,并具有上调大鼠MSCs RARγ基因和 蛋白表达的功能.
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