【摘 要】
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目的：视神经损伤是眼外伤后视功能损害及失明的重要原因,但目前临床上尚无有效的治疗方法.本研究拟建立SD大鼠视神经急性钳夹损伤模型,并用人脐带血间充质干细咆(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)移植到大鼠的眼玻璃体腔内,探索hUCB-MSCs对大鼠急性视神经损伤的抗凋亡与促进神经再生的作用,为将来弥补现有临床治疗手段
【出 处】
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2013年第十九届全国眼外伤学术研讨会暨整合眼外科技术交流会
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目的：视神经损伤是眼外伤后视功能损害及失明的重要原因,但目前临床上尚无有效的治疗方法.本研究拟建立SD大鼠视神经急性钳夹损伤模型,并用人脐带血间充质干细咆(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs)移植到大鼠的眼玻璃体腔内,探索hUCB-MSCs对大鼠急性视神经损伤的抗凋亡与促进神经再生的作用,为将来弥补现有临床治疗手段的不足奠定实验基础.方法：将96只模型大鼠随机分为治疗组(hUCB-MSCs玻璃体腔内注射)和对照组(PBS玻璃体腔内注射),用包括荧光金(Fluorogold,FG)逆行示踪标记SD大鼠视神经急性损伤模型的RGCs并计数；苏木素-伊红(HE)染色观察视神经急性损伤后和间充质干细胞移植后视网膜的形态学变化；Western Blotting检测GAP-43蛋白的变化；RealTime PCR检测GAP-43和P2X7蛋白mRNA情况；免疫荧光检测神经轴突中生长相关蛋白43(growth associated protein 43,GAP-43),促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和ATP配体门控嘌呤受体P2X7的表达情况；Tunel原位检测细胞的凋亡水平等手段比较治疗组和对照组的差别.处理后的第3天,7天,14天和21天取材,每个时间点下治疗组和对照组分别取12只SD大鼠,其中3只用于视网膜铺片FG标记神经节细胞,3只用于Western检测,3只用于Real-Time PCR检测,3只用于免疫组化检测等,同时取对侧眼作正常对照组结果：无论对照组还是治疗组RGCs数目都是随时间逐渐递减的,但同一时间点下治疗组的RGCs数目都要比对照组多(P＜0.05).无论对照组还是治疗组4个时间点RGCs数目逐渐减少,视网膜各层排列逐渐紊乱,并出现畸形核,有的神经节细胞层出现长片段的细胞缺失,但治疗组每个时间点下RGCs的数目、视网膜各层的紊乱程度都要比对照组佳.Western显示无论是对照组还是治疗组GAP-43蛋白表达第3d时和正常组的差异不大,第7d、14d蛋白表达明显增高,但第14d蛋白水平比7d组的蛋白表达略少,开始下降.但治疗组每个时间点下目的蛋白的表达水平的相对灰度值都要比对照组的高；Real-Time PCR显示目的基因GAP-43的mRNA水平治疗组于伤后第3d达到峰值,之后随着时间的延长急剧减少,第21d基因水平极低,与对照组和正常组差异明显(P＜0.01)；对照组于伤后第3d和正常组差异不明显(P＞0.05),之后随时间延长急剧下降,第7d、14d与治疗组和正常组差异明显(P＜0.01),第21d和治疗组无差异(P＞0.05)和正常组差异明显(P＜0.01).P2X7的mRNA水平治疗组于损伤后第3d、7d、14d和正常组差异不明显(P＞0.05)之后开始上升,第21d和正常组有差异(P＜0.05)；对照组的mRNA水平于损伤后第3d开始增高,但和正常组、治疗组差异不明显(P＞0.05),第7d和正常组有差异(P＜0.05),和治疗组差异不明显(P＞ 0.05),之后急剧上升和治疗组、正常组差异明显(P＜0.01).免疫荧光显示视神经损伤后GAP-43蛋白表达量逐渐升高,于第7、14d达峰值,之后开始下降,同时间点的间充质干细胞治疗组GAP-43蛋白表达量都要比对照组的明显增高；Bax的表达量于视神经损伤后对照组和治疗组都随时间延长逐渐增多,但对照组的表达量比治疗组的高.Tunel染色显示无论对照组还是治疗组随时间点凋亡细胞都逐渐增多,但治疗组每个时间点下凋亡细胞都要比对照组少.结论：hUCB-MSCs在大鼠视神经急性损伤中可能具有抗凋亡和促进再生的作用.
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