【摘 要】
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目的:拟探讨prelaminA的特异性识别因子Narf(nuclear prelaminArecognition factor,Narf)是否在其中发挥功能.方法:构建N端(1-78aa)或C端(386-456aa)截短的Naff突变体,与prel
【机 构】
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广东医学院衰老研究所,东莞523808
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目的:拟探讨prelaminA的特异性识别因子Narf(nuclear prelaminArecognition factor,Narf)是否在其中发挥功能.方法:构建N端(1-78aa)或C端(386-456aa)截短的Naff突变体,与prelaminA进行共定位观察,揭示两者的结合部位;免疫荧光方法检测Narf在金属蛋白酶缺失(Zmpste24-/-)导致的prelaminA堆积的小鼠成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的定位是否发生改变;用Western blotting和qRT-PCR检测Zmpste24-/-和prelaminA基因缺失(LMNA-/-)MEFs中Narf的表达情况,并检测prelaminA,laminA及progerin过表达的HEK293T细胞中Narf的水平;在HEK293T中过表达或干扰Naff的表达,用检测了细胞中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)水平.结果及结论:Narf的C端386-456aa区域是与prelaminA结合的非必需区,N端1-78aa则是Narf核定位及与prelaminA相互作用所必须的.prelaminA堆积影响Narf的定位.PrelaminA,laminA及progerin堆积均不影响Narf蛋白水平,但laminA基因缺失可能影响了Narf基因的表达或蛋白的降解速度.Narf过表达不影响细胞SOD水平,但Narf下调细胞中SOD升高.结果表明prelaminA堆积细胞的衰老与Narf关系不明显,而prelaminA缺失导致的衰老和活性氧水平上调可能部分通过Narf的途径来实现.
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