【摘 要】
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本文研究鲇和黄颡鱼脑和性腺中mRNA原位分子杂交定位，材料与方法：黄颡鱼和鲇鱼各5尾.清水中暂养24h,鲜活时解剖,取出卵巢、端脑、间脑、中脑、小脑、延脑.4％多聚甲醛固定1-2小时
【出 处】
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第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会
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本文研究鲇和黄颡鱼脑和性腺中mRNA原位分子杂交定位，材料与方法：黄颡鱼和鲇鱼各5尾.清水中暂养24h,鲜活时解剖,取出卵巢、端脑、间脑、中脑、小脑、延脑.4％多聚甲醛固定1-2小时.系列酒精脱水,二甲苯透明,浸蜡,包埋,切片8μm.原位杂交主要步骤:切片经常规脱蜡至水;3％H2O2室温处理10min;蒸馏水洗2次,滴加3％柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶,室温消化7min;PBS洗3次,蒸馏水洗1次,滴加预杂交液20μ1,恒温箱37℃4h;吸取多余液体,每张切片滴加20μl杂交液,盖上杂交专用盖玻片,恒温箱37℃杂交过夜;杂交后洗涤:滴加封闭液,滴加生物素化鼠抗地高辛37℃60min;PBS洗4次,滴加SABC,37℃20min;PBS洗2次,滴加生物素化过氧化物酶,37℃20min;PBS洗4次,DAB显色;以上所有过程均在湿盒中进行.镜检,阳性细胞呈棕黄色.显微摄影.阴性对照以上述切片的连续切片用不含探针的杂交液进行杂交,其它各步骤均与上述步骤同步进行。
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