【摘 要】
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为探索IBV适应CK细胞培养的分子基础,本研究借助反向遗传操作技术,将两个不同CK细胞嗜性毒株H120和IBYZ的S基因进行交叉替换,拯救获得rH120-S/YZ和rIBYZ-S/H120,通过观察细胞
【机 构】
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中国农业科学院家禽研究所,江苏扬州225003
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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为探索IBV适应CK细胞培养的分子基础,本研究借助反向遗传操作技术,将两个不同CK细胞嗜性毒株H120和IBYZ的S基因进行交叉替换,拯救获得rH120-S/YZ和rIBYZ-S/H120,通过观察细胞病变、病毒荧光及测定增殖曲线,验证了S蛋白在IBV适应CK细胞过程中发挥决定性作用;接着构建以H120为骨架嵌合表达IBYZ株S1或S2基因的重组病毒,结果发现H120-S2/YZ失去感染CK细胞的能力,表明S2蛋白对于IBV适应CK细胞具有关键作用;通过比较IBYZ株适应CK细胞前后的S基因序列,发现S2蛋白上存在1个氨基酸位点V617I的稳定突变;进一步构建V617I位的单位点突变株,间接免疫荧光和增殖曲线结果表明,V617I对IBYZ株适应原代CK细胞具有重要的作用.本文揭示了IBV适应原代CK细胞的分子基础,为今后在细胞水平上的致病机理研究奠定基础.
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