【摘 要】
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获
【机 构】
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四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心,四川雅安 625014
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因并克隆到PMD18-T载体,测序鉴定后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达。表达的重组蛋白分子量大小约37KD,以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30％。利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接种100PFU鸭瘟病毒(DPV)强毒后,利用实时定量PCR检测1h、4h、9h、15h、23h、31h、39h、47h、55h、63h DPV的数量变化。结果:在DPV感染后15 h内,重组鸭IFN-α抗DPV组的病毒核酸拷贝数与不加鸭IFN-α的阳性对照组之间差异不显著；从23h开始鸭IFN-α保护组的核酸拷贝数低于阳性对照组并在感染后47h-55h其拷贝数差异达到最大,差异显著；与阳性对照组的DPV拷贝数相比,鸭IFN-α保护组在55h时能减少病毒108.83个核酸拷贝数,相对抑制率为80％.表明重组鸭IFN-α能明显抑制对数期的DPV复制,具有进一步临床应用的潜力。
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