HtrA1表达被沉默的滋养细胞株HPT-8/pSilencer4.1-HtrA1的构建

• 作 者: 宗璐 苟文丽
• 机 构: 西安交通大学第一附属医院妇产科
• 出 处: 第三届两岸三地妇产科高峰论坛暨西北五省妇产科学术年会
• 发表日期: 2014年5期
• 关键词: 病理妊娠 滋养细胞 丝氨酸肽酶1 核糖核酸干扰 免疫组化法

目的:构建pSilencer4.1/HtrA1质粒,稳定转染人滋养细胞株HPT-8.
方法:免疫组化SABC方法检测HtrA1在HPT-8细胞中的表达; 构建pSilencer4.1/HtrA1质粒; 将pSilencer4.1/HtrA1质粒、pSilencer4.1空白质粒转染HPT-8,观察转染后细胞HtrAl表达.
结果:HPT-8约90％左右的细胞胞浆被染成棕黄色,胞核未见明显染色.转染pSilencer4.1/HtrA1质粒的HPT-8细胞的G418筛选浓度为200μg/ml.RT-PCR、western-blot法鉴定转染细胞HtrA1表达,发现转染Psilence-HtrA1重组质粒的细胞中HtrA1表达水平较空白质粒、正常细胞明显下降(P均＜0.05).空白质粒组、HPT-8组间吸光度值无显著差异(P＞0.05).
结论:成功构建稳定的、HtrA1表达被沉默的滋养细胞株HPT-8/pSilencer4.1-HtrA1,为下一步研究奠定基础.