检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株RNA的双重RT-PCR方法的建立

• 作 者: 汤承[1]张斌[1]张兆敏[1]马莉[2]刘小银[3]李明义[4]岳华[1]
• 机 构: 西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都 610041
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会
• 发表日期: 2008年期

H5亚型禽流感病毒(AIV H5)和新城疫病毒强毒株(vNDV)在全球广泛流行给家禽业造成巨大威胁，建立快速特异的诊断方法有助于两种烈性传染病的控制。本研究建立了检测H5亚型AIV和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR)，实现了单反应管同时扩增H5亚型AIV 150bp的HA及包含编码vNDV融合蛋白(F)裂解位点的282bp F基因特异序列，该方法能同时特异性地检测AIV H5和vNDV，对其它血凝索亚型AIV、弱毒NDV以及其它病原体核酸的检测无特异性扩增条带；对AIV H5、vNDV RNA的最低检测限分别为20.6fg、406fg；从样本处理到报告结果仅需5h。对人工感染H5N1和vNDV临床样本检测为阳性，对H9N2和LaSota人工感染及阴性对照样本的检测为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV检测及检疫提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的方法。