【摘 要】
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Δ6 和Δ9 脂肪酸去饱和酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶之一,都可催化脂肪酸链上特定位置形成双键。在已克隆到中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的Δ6-脂肪酸去饱和酶(Fatty acyl-CoA Δ6desaturase,FAD6)基因和Δ9-脂肪酸去饱和酶(Fatty acyl-CoA Δ9 desaturase,FAD9)基因基础上,为进一步了解其功能,本研究首先根据FAD
【机 构】
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上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海 201306
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Δ6 和Δ9 脂肪酸去饱和酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶之一,都可催化脂肪酸链上特定位置形成双键。在已克隆到中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的Δ6-脂肪酸去饱和酶(Fatty acyl-CoA Δ6desaturase,FAD6)基因和Δ9-脂肪酸去饱和酶(Fatty acyl-CoA Δ9 desaturase,FAD9)基因基础上,为进一步了解其功能,本研究首先根据FAD6 和FAD9 基因序列以及pYES2 载体的多克隆位点分别设计引物,FAD6 引物上下游分别加入BamH I 和Xba I 酶切位点,FAD9 引物上下游分别加入BamH I 和Xho I 酶切位点,利用反转录PCR(RT-PCR)技术,分别克隆其开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,然后亚克隆到穿梭表达载体pYES2 中,以构建重组酵母表达载体pY-FAD6 和pY-FAD9；通过电穿孔法将重组载体转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc 1 菌株中,经筛选与序列验证得到分别含有pY-FAD6 和pY-FAD9 重组质粒的酵母转化株。本实验成功构建了中华绒螯蟹Δ6 和Δ9 基因酵母表达载体,为深入研究FAD6 和FAD9 基因在酵母中的表达作了基础性的准备工作。
其他文献
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凤鲚(Coilia mystus)是溯河洄游鱼类，我国黄渤海、东海和南海均有分布。其中长江口分布最多，是长江口重要鱼类之一，是长江口传统五大渔汛中目前唯一仍有一定产量的种类。为评估凤鲚年龄结构和生长特性的变化趋势，分析了2014 年4 月至11 月采自长江口的624 尾凤鲚样本。结果显示凤鲚繁殖群体由1—4 龄组成。
胆固醇在线粒体和内质网中经过一系列的酶和蛋白转化为睾酮.类固醇合成调控蛋白(StAR)和3β-羟化类固醇脱氢酶(3βHSD)是类固醇合成的限速步骤.斜带石斑鱼3βHSD1 包含ORF 区1125bp,编码374aa.StAR 包含ORF 区861bp,共编码286aa.运用荧光定量PCR 技术,检测在不同组织中3βHSD1 和StAR 的分布.
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本研究通过提取红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)肾脏组织的总RNA,利用RT-PCR 技术扩增得到了白介素(interleukin)15(IL15)基因序列.将IL15 成熟肽序列与原核表达载体PET-32a(+)连接,成功构建了重组表达载体(重组子)PET-32a-IL15.将其重组子转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞后获得了重组表达IL15 的基因工程菌.经IPTG
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