【摘 要】
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效
【机 构】
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四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心,四川,雅安,625000
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛
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利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达的基因工程蛋白分子量大小约37KD,占菌体总蛋白的35％,以包涵体形式存在.利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接种100个噬斑形成单位的鸭瘟病毒(DPV)强毒,利用定量PCR检测1h、4h、9h、15h、23h、31h、39h、47h、55h、63h DPV数量变化的结果表明,基因工程IFN-α能明显抑制对数期的DPV复制,其DPV核酸的拷贝数比空白对照低5×108,表明所表达的基因工程鸭IFN-α具有进一步临床应用的潜力.
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