低温胁迫下番茄LeMPK3基因表达特性及功能分析

来源 :2013中国园艺学会设施园艺分会学术年会蔬菜优质安全生产技术研讨会暨现场观摩会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liufengsheng
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  促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径是真核细胞中普遍存在且保守的信号传导通路,广泛参与植物生长发育和植物抵抗生物和非生物胁迫的防御反应.本研究以番茄(Lycopersicon esculentum Miller)为材料,通过RT-PCR的方法从番茄叶片中分离到一个受低温胁迫诱导的MAPK基因,测序发现其是己知的LeMPK3基因(GenBank注册号:AY261514.1).生物信息学分析表明:该基因全长1119 bp,编码373个氨基酸,推测相对分子质量为42789.8,pI为5.55.LeMPK3包含有MAP激酶11个相对保守结构域和1个TEY的磷酸化基序.对番茄不同组织中LeMPK3基因的转录水平分析表明:LeMPK3基因的转录没有组织专一性.非生物胁迫处理下LeMPK3基因表达研究发现:低温胁迫、高温胁迫、伤害及盐胁迫处理均能诱导LeMPK3基因的转录水平显著上调,外源喷施ABA、H2O2后LeMPK3基因的表达量快速上调.原生质瞬时表达载体定位试验表明:LeMPK3主要定位于细胞核中.构建了植物表达载体PBI121-LeMPK3并转化番茄,用PCR、Northern杂交及Western杂交的方法,对转基因植株作进一步检测,结果证明成功地获得了过表达LeMPK3基因的转基因番茄植株.选取T2代纯合转基因株系及野生型进行生理分析,发现低温胁迫下转基因番茄各株系体内的H2O2及丙二醛(MDA)积累量较野生型番茄少,超氧化物歧化酶(SOD)的活性在转基因植株和野生型植株中未检测到明显差异,而过表达LeMPK3基因显著增强了转基因番茄的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)及抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性.转基因植株的总抗坏血酸(AsA)及脱氢抗坏血酸(DAsA)含量明显高于野生型.根据以上证据有理由推测过量表达LeMPK3基因的转基因番茄抗氧化系统得以改善,低温胁迫下受到的氧化伤害较轻.
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