【摘 要】
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目的：构建猪内源性反转录病毒(Porcine endogenousretrovirus,PERV)囊膜基因绷v的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法：用RT-P
【机 构】
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军事医学科学院野战输血研究所,国家生物医学分析中心病毒安全检测实验室,北京 100850
【出 处】
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2011东莞第二届国际小型猪学术论坛暨大型实验动物生物医药研究应用研讨会
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目的：构建猪内源性反转录病毒(Porcine endogenousretrovirus,PERV)囊膜基因绷v的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪(WuZhiShanminiatuer Digs,WZS)来源PERV的env基因,将其插入pGEM-TEasy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM.T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoR I酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定；将鉴定正确的无内毒素的质粒pHCMV-env,转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况。结果：成功扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建pHCMV—env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后鉴定该细胞系中有目的基因的整合和转录。结论：成功构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为深入研究PERV的细胞嗜性合宿主范围奠定了基础。
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