【摘 要】
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目的:本实验旨在探讨Hedgehog通路在内皮细胞促进胶质瘤干细胞(GSC)自我更新中的可能作用.方法:实验以GL261细胞系中分离的GSC和内皮细胞系b.END3为研究材料,采用Transwell双
【机 构】
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第三军医大学第一附属医院病理学研究所重庆400038
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目的:本实验旨在探讨Hedgehog通路在内皮细胞促进胶质瘤干细胞(GSC)自我更新中的可能作用.方法:实验以GL261细胞系中分离的GSC和内皮细胞系b.END3为研究材料,采用Transwell双室细胞培养、极限稀释法成球实验、实时定量PCR、Western blot、体内移植瘤实验以及慢病毒载体基因干扰等方法,检测内皮细胞对GSC成球、成瘤能力、干性基因表达以及Hedgehog信号通路相关的部分基因的表达的影响.结果:与对照组相比:(1)GSC与内皮细胞共培养后其体外成球能力明显增强,表现为形成干细胞球数目明显增多,体积明显增大,尤其在每孔5个(25％vs12.5％)和每孔10个细胞(37.5％vs25％)的极低浓度下更加明显(P＜0.05).(2)共培养体系中,GSC的干性相关基因Oligo2、Bmi1与Hedgehog信号通路相关基因Gli1的mRNA和蛋白表达明显增加(P＜0.05).(3)体内移植瘤实验发现,与内皮细胞共同注射的GSC成瘤能力明显增强,所形成的移植瘤体积显著大于对照组,而且出现了部分瘤体破溃、小鼠死亡(P＜0.05).(4)通过慢病毒载体基因干扰Smo基因表达抑制Hedgehog信号通路后,内皮细胞促进GSC自我更新的上述现象消失.结论:内皮细胞可能通过激活Hedgehog信号通路促进GSC自我更新.
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