【摘 要】
：
目的:主要通过对WNV-NS1基因重组腺病毒的构建,对西尼罗病毒病的预防进行探索性的研究.方法:pMD18-NS1(AY842931.3)重组质粒由本实验室保存;AdEasyTM Adenoviral Vector Syst
【机 构】
：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001
【出 处】
：
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
论文部分内容阅读
目的:主要通过对WNV-NS1基因重组腺病毒的构建,对西尼罗病毒病的预防进行探索性的研究.方法:pMD18-NS1(AY842931.3)重组质粒由本实验室保存;AdEasyTM Adenoviral Vector System试剂盒(携带腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183 感受态菌)、腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV以及Ad-293细胞由哈尔滨兽医研究所猪病研究室仇化吉研究员惠赠.应用重组腺病毒构建系统,以细菌内质粒间同源重组法构建复制缺陷型腺病毒.以pMD18-NS1重组质粒为模板,应用PCR技术,克隆目的基因,经酶切连接到pShuttle-CMV穿梭载体,经PmeⅠ酶切线性化后,电转入含有腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞中,同源重组,利用卡那霉素平板筛选阳性质粒,经酶切鉴定后,重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,经脂质体Lipofectamine2000转染人胚肾细胞(AD293细胞),用IFA、Western blot检测WNV-NS1 蛋白在AD293细胞内的表达,连续传五代,用PCR 检测目的基因,并测定其病毒滴度.结果:重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定,获得特异性的目的片段,转染AD293细胞后有明显的细胞病变效应,利用IFA、Western blot检测及PCR鉴定,WNV-NS1基因重组到腺病毒的因组中,并随着病毒的复制而表达.第四代重组腺病毒TCID50为:10-7.64/0.1ml.结论:西尼罗病毒NS1蛋白在病毒复制以及免疫保护方面发挥着重要作用,本实验成功的构建出了携带WNV-NS1基因的重组腺病毒,为NS1蛋白的功能研究以及西尼罗亚单位疫苗研制奠定基础.
其他文献
川北一个偏僻乡村的残疾青年,面对绵延的荒山秃岭,突发奇想:植树造林!于是,彻夜未眠,向团中央等部门写信,提出植树造林、保护生态平衡、建设“绿色银行”的建议。团中央很快
徐静蕾病房暂停能量病房,雪白色的灯光,四周悬挂着的吊瓶,散发着浓重而特别的味道,每个人的身上都插着各种各样的管子,从上到下,哪儿还有心思理会什
Xu Jinglei ward to sus
通过对湖北省县以上城镇水厂及水源的调查和监测,结果显示全省城镇供水水源以地面水为主,水源水中pH值、臭和味、肉眼可见物、色度、总硬度、铁、锰、铜、锌、氯化物、溶解性
请下载后查看，本文暂不支持在线获取查看简介。
Please download to view, this article does not support online access to view profile.
本文通过以当前流行禽白血病病毒J亚群(ALV-J)gp85基因片段表达的蛋白为抗原对山东鸡群临床血清进行流行病学调查，以确定当前禽白血病J亚群在鸡群中的感染状况材料方法:从近期
目前,有关冲突管理模式的主流研究都是二维分类结构.既有的冲突管理研究量表及所依托的理论无不建立在冲突当事人视角的基础上,如何考虑除冲突当事人以外的第三方介入(特别是
通过梳理建设项目复杂性的相关研究,发现项目复杂性具有结构性、不确定性和动态性3个本质属性,且由技术复杂性、组织复杂性、目标复杂性、环境复杂性、文化复杂性和信息复杂
随着电力需求日益增多,水电建设工程资金投入和资源消耗(包括人力、材料和机械设备)也越来越大,如何有效地控制成本和高效利用资源成为水电工程管理亟待研究和解决的问题.针
本研究旨在建立一种快速、特异、灵敏、简捷的J亚群禽白血病及其病毒LAMP检测方法,并为后续开发具有实用价值的ALV-J LAMP快速检测试剂盒奠定基础.本研究通过对目前国内流行
甜豆、荷兰豆是豆科属，一年生攀缘草本植物，食用嫩荚。原产欧洲南部及地中海沿岸地区，其营养价值很高，属于高档细菜，在欧美国家种植普遍，我国在广东、广西、四川和云南等南方省市种