【摘 要】
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针对我国口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT.该
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春,130062;锦州学医院畜牧兽医学院,辽宁,锦州,121001军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春,130062
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针对我国口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT.该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因(其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDV YNBS/58株)作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因.将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDV VP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础.
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