鸭副粘病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

• 作 者: 孙敏华[1]董嘉文[1]陈少莺[2]周秀蓉[1]吕殿红[1]李林林[1]胡奇林[1]
• 机 构: 广东省农业科学院兽医研究所,广东省公共卫生公共实验室,广东 广州 510640
• 出 处: 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第一次全国鸭病防控高级研讨会
• 发表日期: 2011年期

　　本研究利用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭副粘病毒免疫6周龄雌性BALB/c小鼠，取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆，经3次亚克隆培养后获得1株能稳定分泌鸭副粘病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1，经鉴定，其抗体亚类为IgM。随后,以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体，辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭副粘病毒多克隆抗体为第二抗体，HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体，建立了检测鸭副粘病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明，当2C1包被量为4μg/孔，鸭副粘病毒110稀释，兔抗鸭副粘病毒多抗作用量为0.1μg/孔，HRP标记的羊抗兔二抗1∶10000倍稀释，每次作用时间为1h时，P/N比值最高，且阳性OD值最接近1.0。该方法可以检测出0.2μg纯化病毒，比传统的HA试验至少敏感64倍；重复性好，批间和批内变异系数均小于10％；特异性良好，不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应。