【摘 要】
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目的 敲除耻垢分枝杆菌mc2155 的esx-3 基因,回补结核分枝杆菌标准毒株H37Rv 的rd1 区esat-6/cfp10 的融合基因,构建重组的耻垢分枝杆菌.方法 (1)从耻垢分枝杆菌基因组中
【机 构】
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101149 首都医科大学附属北京胸科医院细菌免疫室
【出 处】
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中国防痨杂志创刊80周年纪念暨学术会议
论文部分内容阅读
目的 敲除耻垢分枝杆菌mc2155 的esx-3 基因,回补结核分枝杆菌标准毒株H37Rv 的rd1 区esat-6/cfp10 的融合基因,构建重组的耻垢分枝杆菌.方法 (1)从耻垢分枝杆菌基因组中分别扩增出esx-3 基因上游5′端非编码区片段和esx-3 基因下游3′端非编码区片段.利用重组PCR 将以上两个片段拼接在一起,构建esx-3 缺失基因突变序列.(2)利用自杀载体系统P1nil/Pgoal 质粒与突变序列连接.制备成为线性质粒.电转入至耻垢分枝杆菌细胞内并与 esx-3 基因同源交换, 筛选出esx-3 基因被敲除的mc2155 突变菌株IKE.(3)以H37Rv 基因组为模板PCR 扩增esat-6/cfp10 融合基因片断,并连接到PUC-19/PUC-gm-int 质粒载体.电转入esx-3 基因被敲除的mc2155 突变菌株IKE,构建成为最终的回补株IKE-EC.结果 通过同源重组技术成功的将esx-3 基因从耻垢分枝杆菌mc2155 中敲除,并回补了结核分枝杆菌毒株特有的esat-6/cfp10 基因.结论 此实验为后续将进行的敲除回补株在结核分枝杆菌感染中的免疫保护性作用的研究提供菌株.
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