栉孔扇贝脂多糖葡聚糖结合蛋白(LGBP)基因的克隆及其表达的动态研究

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脂多糖葡聚糖结合蛋白Lipopolysaccharide and beta-1,3-glucan binding protein,LGBP作为模式识别蛋白在无脊椎动物的免疫系统中发挥着重要作用。用T3通用引物对感染鳗弧菌栉孔扇贝的全个体cDNA文库进行随机测序,其中得到的一个667m序列c1305ct320cn336与普通蚯蚓的体腔裂解因子前体基因、海胆的β-1,3-葡聚糖酶、非洲疟蚊的革兰氏阴性细菌结合蛋白等有同源性。用T7引物对该克隆测序得到其3’末端。通过SMARY-RACE技术克隆得到该克隆的全长序列。栉孔扇贝LGBP基因由1876个核苷酸组成,它有一个poluA信号序列,编码一条440个氨基酸的多肽。该多肽的分子量估计为47159.076道尔顿,等电点为5.095。推导的氨基酸序列与兰虾、斑节对虾、海胆、非洲疟蚊、淡水螯虾、普通蚯蚓及普通红蚯蚓等无脊椎动物模式识别蛋白具有高度的同源性。该序列含有一个跨膜区、一个N糖基化位点、一个脂多糖结合位点及一个葡聚塘结合位点。经用Garnier法预测,栉孔扇贝LGBP二级结构中各种构象所占比例与普通红蚯蚓的体腔裂解因子前体相近。通过半定量RT-PCR研究了栉孔扇贝在鳗弧菌感染前后LGBP基因的表达情况,结果显示LGBP基因在鳗弧菌感染后表达水平明显提高。
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