人神经生长因子在哺乳细胞CHO内表达及鉴定

来源 :中国生物工程学会生命科学与生物技术前沿学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:WarmAir1982
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:构建人β-神经生长因子(β-NGF)重组真核表达载体,在二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达该基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。 方法:酶切Pcdna3.1-β-NGF获得β-NGF基因,将它连接到真核表达载体Pmd902中,将构建好的Pmd902-β-NGF经脂质体转染法导入到二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞中,用撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)的方法进行筛选,并用ELISA对表达产物进行鉴定。利用鸡胚背根神经节法检测表达产物活性。 结果:重组载体经OCR鉴定、酶切、测序等分析,插入的基因片段为β-NGF的基因。转染β-NGF基因的细胞上清中可检到NGF蛋白。表达产物能够促进鸡胚背根神经节的生长。 结论:成功构建了β-NGF在CHO细胞中的稳定表达体系,转染β-NGF基因的CHO细胞所分泌的β-NGF蛋白具有较高的生物学活性,为进一步研究β-NGF的生物学功能、开展生物治疗和大规模生产重组人神经生长因子奠定了基础。
其他文献
会议
会议
会议
香蕉是热带最重要水果之一,香蕉果实发育过程中淀粉的合成与降解是其重要的生理过程,这个过程不仅决定着香蕉的产量,同时也决定着香蕉果实的品质。淀粉磷酸化酶是在淀粉合成运转
为了充分利用海洋药源生物,利用分子生物学技术,构建了可口革囊星虫的cDNA文库,通过检测确定该文库的滴度约为1.7×105cfu/ml,库容为7.20×106cfu。通过测序获得蚯蚓血红蛋白基因
会议
当莱菌衣藻处于缺铁条件时,一个高亲和的铁吸收体系被诱导产生,其中,FOX1基因编码一个缺铁诱导的铁氧化酶。扫描突变分析显示:FOX1的启动子区域包含2个分离的铁反应元件,FeRE1(CAC
利用双向电泳体系,对广东阳江和浙江乐清两地的泥蚶肌肉全蛋白进行了研究。结果显示:阳江和乐清两地样品平均检测到的蛋白点数分别为674±25和746±34个,平均匹配率为78.6%。通过
会议
热休克蛋白70是生物进化上高度保守、功能上至关重要的蛋白。成功地从可口革囊星虫血液中获得热休克蛋白70基因的全长序列,该基因cDNA全长2520bp,5-端非编码区为125bp,3-非编码