【摘 要】
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[目的]研究miRNA在介导顺铂对SH-SY5Y神经细胞毒性中的作用及其可能的分子机制.[材料和方法]向SH-SY5Y细胞中加入一定浓度梯度的顺铂并作用24小时,用MTT法测定顺铂对SH-SY5Y细胞的半数抑制浓度(IC50)；顺铂IC50作用于SH-SY5Y细胞,用流式细胞术检测顺铂对SH-SY5Y细胞周期及凋亡的影响；用Western blot检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1,CCN
【机 构】
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武汉大学基础医学院病理学与病理生理学系,武汉;贵州医学大学环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室,贵州
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究miRNA在介导顺铂对SH-SY5Y神经细胞毒性中的作用及其可能的分子机制.[材料和方法]向SH-SY5Y细胞中加入一定浓度梯度的顺铂并作用24小时,用MTT法测定顺铂对SH-SY5Y细胞的半数抑制浓度(IC50)；顺铂IC50作用于SH-SY5Y细胞,用流式细胞术检测顺铂对SH-SY5Y细胞周期及凋亡的影响；用Western blot检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1,CCND1)和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved PARP及Cleaved caspase-3的表达变化；用Real-time PCR检测芯片结果中提示的顺铂所致miRNA的表达变化；根据Real-time PCR结果选择差异性较大的miRNA,分别促进和抑制其表达并联合使用顺铂,观察它们对顺铂毒性的调控作用.[结果]顺铂显示出对SH-SY5Y细胞的毒性作用,细胞活力随着顺铂浓度的增加而逐渐降低；将顺铂ICs0分别作用于SH-SY5Y细胞24小时,48小时和72小时,流式结果提示顺铂在作用48小时和72小时可以使其细胞周期阻滞在G1期(p＜0.01), 并诱导其凋亡(p＜0.01),且72小时凋亡率高于48小时凋亡率(p＜ 0.05)； Western blot结果显示CCND1和Bcl-2的表达随时间的增加而减少,Bax、Cleaved PARP及Cleaved caspase-3的表达随时间的增加而增加；Real-time PCR结果表明,顺铂IC50在48小时和72小时均可以明显促进miR-128,miR-139,miR-323和miR-503的表达(p＜0.01)并抑制miR-10b和miR-21的表达(p＜0.01)；用化学合成的miRNA模拟物促进外源性miR-139和miR-503的表达,可以有效抑制CCND1和Bcl-2的蛋白水平(p＜0.01),增加Bax、Cleaved PARP及Cleaved caspase-3的表达并增加顺铂对SH-SY5Y细胞的凋亡作用(p＜0.05)；用化学合成的miRNA inhibitor抑制内源性miR-139和miR-503的表达,可以提高CCND1和Bcl-2的蛋白水平,降低Bax、Cleaved PARP及Cleaved caspase-3的表达并减弱顺铂对SH-SY5Y细胞的凋亡作用(p＜0.05)；荧光素酶报告基因检测结果显示miR-139和miR-503均可以抑制CCND1和Bcl-2 3UTR的活性(p＜0.05).[结论]miR-139和miR-503可能通过靶向调控CCND1和Bcl-2 3UTR并抑制其表达,介导了顺铂所致SH-SY5Y神经细胞的毒性损伤.
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