氯丙醇类化合物对T淋巴细胞的毒性及机制研究

• 作 者: 卢静 关爽 张爽 许琳莉 黄国任 宋博翠 王振宁 张顾男 邓旭明
• 机 构: 动物医学学院吉林大学 长春130062
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
• 发表日期: 2015年9期
• 关键词: 3-MCPD(+) 2 3-DCP NFAT DTH Ca2+、NF-κB、 AP-1 免疫抑制

　　[目的]氯丙醇类化合物是目前被国际上广为关注的食品污染物,包括3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)、1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)、2,3-二氯-丙醇(2,3-DCP)等,其中3-MCPD含量最大。据报道3-MCPD具有免疫抑制作用,能降低CD4+CD8+T细胞比值,但其机制不清楚,2,3-DCP对免疫系统毒作用未见报道；T淋巴细胞是数量最多的淋巴细胞,具有重要的免疫功能。因此,本研究旨在阐明3-MCPD(+)、和2,3-DCP对小鼠T淋巴细胞免疫毒性及机制。[方法]在体外实验中,采用MTT法考察受试物对小鼠脾淋巴细胞的细胞毒作用,在非细胞方法毒性剂量下采用流式细胞术分析、ELISA试剂盒检测、RT-PCR、细胞内钙离子的荧光测定、western blot等技术考察受试物对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖、细胞周期、T细胞表面标志、细胞因子、细胞内钙离子浓度、CD3 T细胞pIκBα、IκB、NF-κB、NFAT2、AP-1等蛋白表达的影响；在体内实验中,构建二硝基氟苯(DNFB)所致的迟发型超敏反应(DTH)小鼠模型,考察了受试物对二硝基氟苯(DNFB)诱导的迟发型超敏反应(DTH)的影响。[结果]体外实验确定3-MCPD(+)、和2,3-DCP的非细胞毒性剂量范围为1-4mM,该剂量范围内的3-MCPD(+)和2,3-DCP剂量依赖地抑制T细胞的免疫功能。其中3-MCPD(+)(1,2,4mM)剂量依赖地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖、降低CD4+T淋巴细胞的数量和CD4+/CD8+T细胞比值、阻止T淋巴细胞进入到S期、抑制Th1和Th2细胞因子分泌和IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-6基因表达、抑制细胞内Ca2+浓度和钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)及P-CaMKⅡ蛋白表达、并抑制p-IκB、NFAT2和AP-1蛋白表达、促进IκB蛋白表达,但对CD8+T淋巴细胞数量无明显影响；2,3-DCP(1,2,4mM)剂量依赖地抑制ConA诱导的脾淋巴细胞增殖,并使S期细胞比例增多,降低CD4+T细胞比例和CD4+/CD8+比值,降低细胞分泌Th1细胞因子,并在剂量为4mM时降低细胞分泌Th2细胞因子,抑制NFAT2、pIκ Bα和p65 NF-κB蛋白表达,促进IκB蛋白表达；体内实验表明3-MCPD(+)(10,20,40mg/kg)和2,3-DCP(10,20,40mg/kg)降低DTH诱导迟发型超敏反应小鼠耳廓重量、耳组织的水肿和炎性细胞浸润。[结论]3-MCPD(+)和2,3-DCP对BALB/c小鼠T淋巴细胞具有免疫抑制作用,这种抑制作用可能是通过抑制Ca2+、NF-κB、NFAT及AP-1信号通路来实现的。该研究为3-MCPD(+)和2,3-DCP对T淋巴细胞的免疫抑制机制和进一步的安全性评价提供毒理学依据。