【摘 要】
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目的 研究MAGE-A1和MAGE-A3基因在脑胶质瘤中的表达情况,并探讨其可能的表达机制.方法 选取神经外科手术切除的脑胶质瘤标本78例,均经病理证实为脑胶质瘤,且术前未进行过放疗和化疗,15例正常脑组织作为阴性对照.提取组织标本RNA,应用RT-PCR的方法检测MAGE-A1和MAGE-A3在基因水平的表达率及分析各目的条带的相对灰度值,提取基因组DNA,应用甲基化PCR技术分析MAGE-A1
【出 处】
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2016河北省神经病学术年会、河北省中西医结合学会神经内科专业委员会学术年会暨第二届京津冀脑血管病论坛
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目的 研究MAGE-A1和MAGE-A3基因在脑胶质瘤中的表达情况,并探讨其可能的表达机制.方法 选取神经外科手术切除的脑胶质瘤标本78例,均经病理证实为脑胶质瘤,且术前未进行过放疗和化疗,15例正常脑组织作为阴性对照.提取组织标本RNA,应用RT-PCR的方法检测MAGE-A1和MAGE-A3在基因水平的表达率及分析各目的条带的相对灰度值,提取基因组DNA,应用甲基化PCR技术分析MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的甲基化状态,分析两者的基因表达与基因启动子区甲基化状态之间的关系,选取低表达MAGE-A1及A3基因的胶质瘤细胞系U251和不表达的这两基因的U87细胞进行培养,并应用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR及组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对细胞系进行处理,根据给药方式分为9组,第1～3组5-aza-CdR终浓度均为0 μmol/l,TSA终浓度分别为0、0.5、1 μmol/l,第4～6组5-aza-CdR终浓度均为2.5 μ mol/l,TSA终浓度分别为0、0.5、1 μ mol/l,第7～9组5-aza-CdR终浓度均为5 μ mol/l,TSA终浓度分别为0、0.5、1 μ mol/l,每瓶细胞均于给药培养24小时及48小时更换培养液并重新加药,药物刺激72小时后,更换没有药物的新鲜培养液,再培养48小时后,收集细胞,提取RNA,检测处理前后U251和U87细胞中MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达情况.结果 正常脑组织中均未发现MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA表达.78例胶质瘤组织中有51例MAGE-A1 mRNA表达阳性,阳性率为65.4％；有30例MAGE-A3 mRNA表达阳性,阳性率为38.5％.MAGE-A1(x 2=37.289,p=0.000)和MAGE-A3(x 2=36.066,p=0.000)基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性.MAGE-A1和A3 mRNA在第1～3组U87细胞中,MAGE-A1和A3 mRNA表达均为阴性,在第4～6组U87细胞中,MAGE-A1和A3 mRNA较第1～3组表达高,且随着TSA浓度的增强逐渐增强,在第7～9组U87细胞中,MAGE-A1和A3mRNA的表达较第4～6组高,且随着TSA浓度的增强逐渐增强.MAGE-A1和A3mRNA在第1～3组U251细胞中,MAGE-A1和A3有少量表达,在第4～6组U251细胞中,MAGE-A1和A3的表达较第1～3组表达量高,且随着TSA浓度的增高逐渐增强,在第7～9组U251细胞中,MAGE-A1和A3的表达较第4～6组高,且随着TSA浓度的增高逐渐增高.由此我们发现,细胞在接受单独5-aza-CdR,单独TSA或两者联合应用时对胶质瘤细胞系MAGE-A1和A3的表达影响不同,在细胞单独给予TSA不能引起MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达激活,单独给予5-aza-CdR或与TSA合用可以引起两个基因的表达激活,且两者合用的作用好于单独给药,两者有协同作用.结论 正常脑组织中无MAGE-A1和A3基因的表达,胶质瘤组织中两者有不同程度的表达,DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是这两个基因表达的重要机制,其中,以DNA启动子区甲基化占主导地位.
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