【摘 要】
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羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB,EC 3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku.天然存在的CPB是由前羧肽酶原B(preprocarboxypeptidase B)产生的,其N-末端包含108个氨基酸(其中13个氨基酸为信号肽序列,95个氨基酸组成活性肽部分)的片段与C端的CPB
【机 构】
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华东理工大学生物反应器国家重点实验室(上海);中国科学院上海生命科学研究院生物工程中心(上海) 中
【出 处】
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2004年全国生化与生物技术药物学术年会
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羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB,EC 3.4.17.2)是一种含锌的胰外肽酶,特异的水解肽链C端的碱性氨基酸:精氨酸,赖氨酸或鸟氨酸,CPB含307个氨基酸,分子质量35ku.天然存在的CPB是由前羧肽酶原B(preprocarboxypeptidase B)产生的,其N-末端包含108个氨基酸(其中13个氨基酸为信号肽序列,95个氨基酸组成活性肽部分)的片段与C端的CPB相连,前羧肽酶原B在转运到内质网的过程中,信号肽被切掉,得到不具酶活性羧肽酶原B(procarboxypeptiedase B,pCPB)从细胞中分泌出来,然后通过胰蛋白酶将其酶解为具酶活性的CPB和活性肽部分.由于CPB是一种蛋白水解酶,在体内以酶原形式分泌,直接表达CPB可能会对表达系统产生影响,故考虑用酶原的形式表达,表达出的pCPB再进行胰蛋白酶酶切获得具酶活性的CPB.目前,商业及研究中使用的CPB均为从动作胰腺提取,价格昂贵,而且并不能完全去除其他蛋白酶.对于羧肽酶的克隆、表达仅有一篇文献报道,但没有对重组羧肽酶B应用方面的报道.本研究用羧肽酶原B基因克隆表达酶原,再进行蛋白酶切的方法得到CPB,该方法简单可行,表达量高,经DEAE-FF一步纯化后,每升可得28.5mg的重组CPB,与生物提取相比,具有价廉、无污染的特点.
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