【摘 要】
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目的：探讨最大非毒性剂量的汉防己甲素(Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏作用及增敏机制.方法：采用MTT法寻找Tet针对CNE1和CNE2细胞株的最大非毒性剂量,MTT法及克隆形成实验验证Tet对CNE1和CNE2的放疗增敏作用,Western blotting检测凋亡因子caspase3的表达,彗星电泳实验及Westem blotting检测细胞DNA断裂情况,流式细胞术检测细
【机 构】
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中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科 510630
【出 处】
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2015年全国鼻科年会暨第七届鼻部感染与变态反应疾病专题学术会议
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目的：探讨最大非毒性剂量的汉防己甲素(Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏作用及增敏机制.
方法：采用MTT法寻找Tet针对CNE1和CNE2细胞株的最大非毒性剂量,MTT法及克隆形成实验验证Tet对CNE1和CNE2的放疗增敏作用,Western blotting检测凋亡因子caspase3的表达,彗星电泳实验及Westem blotting检测细胞DNA断裂情况,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测不同处理后p-CDC25C、p-CDK1、CDK1和CyclinB1的表达.
结果：Tet对CNE1和CNE2的最大非毒性剂量分别为1.5μmol/L和1.81μmol/L;与单纯放疗相比，该浓度的Tet联合放疗可以明显抑制细胞的增殖及细胞克隆数的形成，放疗增敏比分别为1.73和1.40(P<0.05);最大非毒性剂量Tet联合放疗后可增加放疗引起的DNA断裂，上调γ-H2AX和cleaved-caspase3的表达;单纯放疗组CNE1和CNE2细胞周期G2/M期的比例分别为(42.62±2.07)％和(34.82±2.74)%，最大非毒性剂量Tet联合放疗组CNE1和CNE2细胞周期G2/M期的E例降为(17.02±1.87)%和(19.64±4.82)%(P<0.01);采用0.75μmol/L和1.5μmol/L Tet处理CNE1细胞株，0.9μmol/L和1.8μmol/L Tet处理CNE2细胞株，p-CDC25C,p-CDK1、总CDK1的表达无明显变化(P<0.05),采用3.0μmol/L和6.0μmol/L Tet处理CNE1细胞株，3.6μmol/L和7.2μmol/L Tet处理CNE2细胞株，p-CDC25C和p-CDK1表达明显升高(p<0.05);对CNE1和CNE2细胞株采用最大非毒性剂量Tet联合放疗和单纯放疗处理2h.6h和24h，联合处理可明显降低放疗引起的p-CDC25C,p-CDK1的高表达(P<0.05)，上调放疗后Cycling1的表达(P<0.05).而对总CDK1的表达无明显调节作用(P<0.05)。
结论：最大非毒性剂量Tet可增加CNE1和CNE2的放疗敏感性，并增加放疗引起的细胞凋亡及DNA断裂:放疗增敏的机制可能与Tet激活CDC25C/CDK1/CyclingB1通路，去除放疗导致的G2/M期阻滞，进而减少DNA的修复有关。
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