【摘 要】
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反向遗传操作技术是近几年发展起来的新的方法学,为相关研究开阔了视野,具有良好的应用前景。利用8质粒流感反向遗传系统将流行病毒株主要的保护性抗原HA和NA基因与鸡胚高度
【基金项目】
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教育部创新团队项目(IRT0723);新世纪优秀人才支持计划(NCET-06-0752);教育部留学回国人员科研启动基金(教外司留[2006]331号);国家863计划(2006AA10A204);广东省自然科学基金创新团队项目(5200638);广东省科技计划项目(2005A20901003，2006821101001，200680152);科技部农业成果转化资金项目(05EFN2144002
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反向遗传操作技术是近几年发展起来的新的方法学,为相关研究开阔了视野,具有良好的应用前景。利用8质粒流感反向遗传系统将流行病毒株主要的保护性抗原HA和NA基因与鸡胚高度适应的毒株的6个内部基因进行重配,以这种6+2的方式能够很快的生产出针对流行病毒株的疫苗。H1N1和H3N2亚型SIV是目前引起我国猪流感主要病原。将猪流感的流行毒珠A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)(简称为SIV-170)的HA和NA基因克隆至自行构建的双向转录和表达载体pSM-B5中,构建双向质粒pSMB-170HA和pSMB-170NA,用这两种质粒与8质粒病毒拯救系统中含有流感病毒A/Puerto Rico/8/34(H1N1)的6个内部基因的质粒组合(6+2重排),共转染293T细胞,换液后继续培养60h,收获培养液接种11日龄SPF鸡胚,35℃孵育48h,收获尿囊液,测定其有无血凝活性。为了鉴定所获救病毒是否为所需要的病毒,抽提有血凝活性的尿囊液,RT-PCR扩增后进行序列测序及分析,所获得的重组病毒命名为170B-H1N1/PR8株。拯救出的第一代重组病毒170B-H1N1/PR8株的HA效价达到了10log2以上,说明其保持了PR8株在鸡胚上高度的适应性。将该重组毒在SPF鸡胚上连传5代,测定的各代的HA效价均保持在10log2以上,同时第5代重组毒的序列测定结果表明重组毒的HA和NA序列保持不变,说明该病毒有较好的稳定性。重组的170B-H1N1/PR8病毒感染鸡胚的能力强,能够产生高滴度的病毒,而且对鸡胚没有致病力,进一步的实验正在进行中,该重组毒有望成为H1N1亚型猪流感的疫苗候选株。
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