【摘 要】
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以冬枣花为试材,利用同源克隆法技术获得了枣ATP1基因序列.克隆所得序列在NCBI数据库中进行BLASTN分析,确定该基因ORF长度为1530bp,编码509个氨基酸.与葡萄、苹果的序列同源性分别达到98％、97％.进一步利用ProtParam tool、Protscale、TMHMM、PSORT、SignalP4.1 Server、ExPASy Proteomics Server等软件对该序列进
【机 构】
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河北农业大学林学院,保定071000 河北农业大学生命科学学院,保定071001
【出 处】
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第六届全国果树分子生物学学术研讨会
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以冬枣花为试材,利用同源克隆法技术获得了枣ATP1基因序列.克隆所得序列在NCBI数据库中进行BLASTN分析,确定该基因ORF长度为1530bp,编码509个氨基酸.与葡萄、苹果的序列同源性分别达到98％、97％.进一步利用ProtParam tool、Protscale、TMHMM、PSORT、SignalP4.1 Server、ExPASy Proteomics Server等软件对该序列进行生物信息学分析.同时设计荧光定量引物,以ACT基因为内参,分别对雄性不育品种(雄性不育2号)、可育品种(月光)和中度败育品种(冬枣)的嫩枝、老枝、叶、蕾和花进行了组织特异性表达分析.根据ExPASy ProtParam分析,ATP1序列等电点5.84,相对分子量55.280kD.不稳定系数(Instability index)为36.75,其值小于40,说明该蛋白是一个稳定蛋白.枣ATP1基因所编码蛋白序列亲疏水性在128个氨基酸处出现最小值为-2.644,在448和449处出现最大值为2.300,GRAVY(即总平均亲水性)值为-0.066,结合跨膜结构区分析发现此蛋白不存在疏水的跨膜序列,据此推测枣ATP1为亲水性蛋白.组织特异性表达分析表明,ATP1基因在供试三个品种的各组织中均有表达,而且在雄性可育品种月光各组织中表达量均高于其他两个品种；进一步对月光和冬枣花的各部分组织(花萼、花瓣、雄蕊、子房)进行表达分析发现,ATP1基因在花各组织中均有表达,但在花瓣中表达量最低,在雄蕊和子房中表达较高.上述结果表明ATP1基因确实在雄性不育与可育品种间出现表达差异,但这种差异是品种不同造成的还是育性差异导致的尚需进一步研究确定.
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