靶向EGFR的人工microRNA的腺病毒构建及鉴定

• 作 者: 陈嘉 陈萍 张守德 凌奕 严毛晓 曹江 杨蓓蓓
• 机 构: 浙大医学院附属第二医院 浙大医学院附属邵逸夫医院
• 出 处: 中华医学会2016全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议
• 发表日期: 2016年8期
• 关键词: 喉癌 EGFR 人工microRNA

　　目的 构建靶向EGFR的人工microRNA的病毒载体,用于抑制肿瘤细胞增殖,实现特异高效诱导细胞凋亡的目的.方法 利用网络资源设计针对人EGFR的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至腺病毒表达质粒pDC312-SLPI-pA上,得到腺病毒穿梭质粒pDC312-SLPI-EGFR amiR-pA,与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装重组腺病毒Ad-SLPI-EGFRamiR.将Ad-SLPI-EGFR amiR感染喉癌Hep-2细胞后,观察细胞形态改变,MTT检测细胞增殖情况,Western blot检测EGFR的表达,以评估EGFR人工microRNA的作用效果.