【摘 要】
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目的 应用重亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基
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目的 应用重亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基化的Wnt信号通路抑制基因,并探讨BSP法作为定量研究基因甲基化方法的优缺点.方法 以NB4细胞为研究对象,20例健康人单个核细胞(MNC)为对照组；常规提取DNA并用亚硫酸氢盐处理；然后用PCR扩增目标序列,应用重亚硫酸氢盐测序法(BSP),分析在NB4细胞中Wnt信号通路抑制基因基因的甲基化状态.并通过与甲基化特异性PCR (Methylation specific PCR,MSP)、焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)比较,探讨BSP法对NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化状态优缺点.结果 BSP产物克隆测序检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别：WIF-1基因95.26％,DKK3基因86％,SFRP1基因81.67％,SFRP2基因95.71％, SFRP4基因85％,SFRP5基因95％；20例健康人单个核细胞(MNC)为对照组中甲基化发生率分别：WIF-1基因1.5％,DKK3基因4.2％,SFRP1基因0％,SFRP2基因0.9％,SFRP4基因2.5％,SFRP5基因1.75％,与正常人相比,NB4细胞的Wnt信号通路相关抑制基因启动子甲基化率明显增高.
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