【摘 要】
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环境中存在的许多污染物,通过与生物大分子,特别是一些核受体的相互作用,可以影响或者改变生物分子的空间结构和功能。研究二者亲和力的强弱以及作用点对于污染物致毒激
【机 构】
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中国科学院生态环境研究中心,环境化学与生态毒理学国家重点实验室,北京 100085
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环境中存在的许多污染物,通过与生物大分子,特别是一些核受体的相互作用,可以影响或者改变生物分子的空间结构和功能。研究二者亲和力的强弱以及作用点对于污染物致毒激励和生命安全的探索具有重要的意义。环境中的许多化学污染物都具有一定的雌激素活性,这些污染物能模拟人体内正常的雌激素如17β-雌二醇(E2)等,并通过扰乱正常的雌激素信号传导通路,来干扰生物体的内分泌功能,对机体、后代引起有害效应。传统的方法如质谱和核磁共振都需要复杂的样品前处理过程,不具备位点特异性。荧光光谱法中结合方式特异的荧光指示剂数目有限,无法得到所有位点的结合信息,对于无法到得IC50 的竞争计算不出结合常数。本研究应用表面等离子体激元共振(surface plasmon resonance,SPR)技术,该方法具有快速,免标记,能够实时检测分子结合,易获得高质量的动力学信息的优点。我们首先在金基底上用氨基偶联的方法固定雌激素受体抗体,然后通过抗原抗体相互作用的方式结合雌激素受体,并通过用牛血清蛋白封闭未结合的位点降低非特异性吸附,采用不同浓度的污染物流经雌激素受体表面,得到了污染物的结合曲线。通过推导计算可以得到污染物与雌激素受体的结合常数。该方法可以实现快速、高通量筛查具有雌激素效应的污染物,为进一步考察污染物对雌激素受体的构效关系奠定基础。
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