【摘 要】
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本文利用合成生物学方法,通过设计生物砖元件及生物系统来调控依赖两种辅酶的相应1,3-丙二醇氧化还原酶的表达,构建了编码基因分别为dhaT 基因和yqhD 基因的两类生物砖元件,可相应地表达依赖于NADH辅酶和NADPH辅酶的1,3-丙二醇氧化还原酶及其同工酶.在此基础上,研究了不同生物转元件的表达效率,并对1,3-丙二醇氧化还原酶最优培养条件.对诱导时间、诱导温度、IPTG用量进行考察,结果显示最
【机 构】
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厦门大学化学化工学院;厦门市合成生物技术重点实验室 厦门大学化学化工学院;厦门市合成生物技术重点实
【出 处】
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第七届中国工业生物技术发展高峰论坛
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本文利用合成生物学方法,通过设计生物砖元件及生物系统来调控依赖两种辅酶的相应1,3-丙二醇氧化还原酶的表达,构建了编码基因分别为dhaT 基因和yqhD 基因的两类生物砖元件,可相应地表达依赖于NADH辅酶和NADPH辅酶的1,3-丙二醇氧化还原酶及其同工酶.在此基础上,研究了不同生物转元件的表达效率,并对1,3-丙二醇氧化还原酶最优培养条件.对诱导时间、诱导温度、IPTG用量进行考察,结果显示最优诱导条件为IPTG 0.1mM、30℃、150rpm诱导10h.与诱导前发酵条件下的酶活力相比,结果显示RBS1.0酶活力显著提高,粗酶活由52U／ml提高到211U／ml,比活由12.1U／mg提高到40.3U／mg,后者是前者的三倍多,高于现有文献报道.而其他RBS效率(RBS0.6、RBS0.3、RBS0.07)优化后也比优化前的酶活提高了2倍左右.据此,可进一步对辅酶并用的内在机制进行分析和建模,进而有利于构建出更优的1,3-丙二醇生物转化体系.
其他文献
生物脱胶主要包括酶法脱胶和微生物脱胶两种方法.酶法脱胶是直接利用脱胶酶制剂作用于苎麻上,利用酶的生物活性,降解苎麻纤维外包裹的胶质复合体,从而使纤维分离出来.脱胶酶以果胶酶为主、辅以木聚糖酶和木质素降解酶.酶法脱胶所需的时间较短,不需要微生物生长所耗费的培养时间,设备简单,是今后脱胶的主流发展方向.本研究按照毕赤酵母的密码子偏爱性,将枯草芽孢杆菌的碱性果胶酶基因进行了全合成,优化后的基因在毕赤酵母
本研究前期克隆获得木聚糖酶基因xynHB,可以在毕赤酵母中表达,表达的重组酶发生了糖基化,在60℃半衰期只有12min.本研究将该基因编码产物的214位糖基化位点氨基酸N突变为A,突变体基因命名为xynHBn3,突变体在毕赤酵母表达的重组酶在60半衰期由12min提高到65min.为了证明热稳定性提高是糖基化的原因还是氨基酸发生突变的原因,我们又将原始基因和突变体基因在大肠杆菌进行了表达纯化,结果