【摘 要】
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本研究将荧光定量PCR技术与ABI定量检测系统相结合,建立了猪瘟病毒实时荧光RT-PCR快速检测技术。根据GenBank上下载的29条CSFV全长序列、18条BVDV-Ⅰ和6条BVDV-Ⅱ全序列进行
【机 构】
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中国兽医药品监察所,北京 100081
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本研究将荧光定量PCR技术与ABI定量检测系统相结合,建立了猪瘟病毒实时荧光RT-PCR快速检测技术。根据GenBank上下载的29条CSFV全长序列、18条BVDV-Ⅰ和6条BVDV-Ⅱ全序列进行综合排列、比较,同时为保证猪瘟荧光探针的特异性,避开与BVDV同源部分,设计了5组猪瘟病毒的特异性探针和引物。通过对5组探针和引物的筛选,反转录酶浓度、上下游引物浓度和探针浓度的进一步优化,建立了荧光RT-PCR检测猪瘟病毒的试验方法。在敏感度试验方面,与免疫荧光技术(HCFA)方法符合率为83％,且比HCFA方法更敏感,较常规Nest-PCR方法敏感100倍;在其他病原体的特异性试验中,其他病原的检出率均为零,说明该方法具有很强的猪瘟病毒特异性;与进口一步法试剂Ready-To-Go RT-PCR Beads和常规Nest-PCR相比,从反应时间、CT值表现、荧光增幅和试验成本等多方面都体现了荧光RT-PCR检测猪瘟病毒的优越性,初步建立了特异、灵敏、快速的猪瘟病毒实验室诊断方法。
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